Telomere dysfunction and tumour suppression: the senescence connection  Saiba quanto vai viver! –Requer tesoura, pinça, frasco de cultura, meio, tripsina.

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1 Telomere dysfunction and tumour suppression: the senescence connection  Saiba quanto vai viver! –Requer tesoura, pinça, frasco de cultura, meio, tripsina   Hayflick and Moorhead há 40 anos: 60-80 passagens – –Beta galactosidase associada a senescência, vacúolos, grande, chata –Erosão telomérica = DNA Damage Response (DDR)  Telômeros: nascemos com 8-12 Kb, perdemos –TTAGGG  fita rica em G livre (3’) = evento pós-replicativo  Substrato da elongação pela Telomerase –Telomerase  TERC = molde de RNA  TERT = transcriptase reversa –Proteínas  telomeric-repeat binding factor 1 (TRF1), TRF2, RAP1, TERF1-interacting nuclear factor 2 (TIN2), TPP1 and POT1. The TPP1–POT1 heterodimer regulates telomerase access to the telomeric substrate.

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3 Homo sapiens telomerase RNA component (TERC), non-coding RNA >gi|38176147|ref|NR_001566.1| Homo sapiens telomerase RNA component (TERC), non-coding RNA GGGTTGCGGAGGGTGGGCCTGGGAGGGGTGGTGGCCATTTTTTGTCTAACCCTAACTGAGAAGGGCGTAG GCGCCGTGCTTTTGCTCCCCGCGCGCTGTTTTTCTCGCTGACTTTCAGCGGGCGGAAAAGCCTCGGCCTG CCGCCTTCCACCGTTCATTCTAGAGCAAACAAAAAATGTCAGCTGCTGGCCCGTTCGCCCCTCCCGGGGA CCTGCGGCGGGTCGCCTGCCCAGCCCCCGAACCCCGCCTGGAGGCCGCGGTCGGCCCGGGGCTTCTCCGG AGGCACCCACTGCCACCGCGAAGAGTTGGGCTCTGTCAGCCGCGGGTCTCTCGGGGGCGAGGGCGAGGTT CAGGCCTTTCAGGCCGCAGGAAGAGGAACGGAGCGAGTCCCCGCGCGCGGCGCGATTCCCTGAGCTGTGG GACGTGCACCCAGGACTCGGCTCACACATGC

4 Complexo armadura  telomeric repeat-binding factor 1 (TRF1, also known as TERF1)  TRF2 (also known as TERF2)  TERF1-interacting nuclear factor 2 (TIN2, also known as TINF2)  protection of telomeres 1 (POT1)  the POT1- and TINF2- interacting protein (TPP1, also known as ACD)  transcriptional repressor/activator protein RAP1 (also known as TERF2-interacting protein (TERF2IP) Perda de proteínas do complexo (DNA telomérico na fusão)  erosão (DNA telomérico na fusão)  erosão

5 Encurtamento dispara DDR   Ativação em células senescentes  DNA damage response – –phosphorylated γ-H2AX – –p53-binding protein 1 (TP53BP1) – –NBS1 (also known as nibrin) – –MDC1 – –CHK2 – –Indução de p21 e p16  senescência – –Ativação de ATM (Chk1) e ATR (Chk2)  p53-P | mdm2  p21 – –Ativação de apoptose   Muitas localizadas em foco telomérico disfuncional   Disfunção promove re-entrada em proliferação   Célula sem p53 e Rb divide mais... – –e encurta muuuuuito o telômero!!! – –Crise, rearranjos cromossômicos, telomerase!

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7 Lucas e Leo  Na sexta geração sem TERC a coisa fica feia. –Pele, sangue, reprodução –Atrofia testicular é evitada por perda de p53 –Perda de p53 na sexta geração imita tumores em velhos  Pele, mama, intestinos  Um tumor do bão refaz vc em dois meses.  Cruzamentos de camundongos –P16 p19 -/- com terceira geração dá muito tumor (UV, 64%) –Já com geração 6, telômero muito curto, reduz (31%, p53 intacta) Telômero funcional  senescência e apoptose  inibição tumor

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10 Papel da senescência telomérica como supressora de tumor  Myc induzido, cruzado com muitas gerações: –Tumorogênese reduzida (controle: linfoma em 200 dias)  G1  Stem cells  +bcl2  tumores em seis semanas  G6  +bcl2  nenhum tumor até 100 dias! (  G6  +bcl2  nenhum tumor até 100 dias! (SA-β-Gal)   Logo, telômero curto pode produzir senescência independente de apoptose  TP53 R172P: –não induz apoptose –Induz senescência () via depleção de TRF2 –Induz senescência (SA-β-Gal) via depleção de TRF2  Apoptose e senescência como supressores! (becape)

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12 Terapias com telômero como alvo (ops... requer p53! Só 50% dos tumores...)  B1BR1532 é um anti-telomerase –Encurta telômero em células de fibrosarcoma –Diminui tumorogênese em reimplantes  GRN1631 é antisense de TERC –Inibe metástases em pulmão originadas de mama  TPP1 e POT1 da armadura são alvos –O loop t forma quadrifita (G4) que ativa forte DDR  Camundongos suportam papel de senescência in vivo na supressão de tumores induzida por encurtamento telomérico  Surpresa: pouco papel de apoptose, independente de senescência.  Mas senescência é via p53 e p21  DDR