1. Energia radiante = Radiação eletromagnética

Apresentação em tema: "1. Energia radiante = Radiação eletromagnética"— Transcrição da apresentação:

1 1. Energia radiante = Radiação eletromagnética
Fluorescência 1. Energia radiante = Radiação eletromagnética Natureza da radiação eletromagnética Espectro eletromagnético. Natureza dual: onda/partícula 2. Fluorescência. Interação radiação eletromagnética-matéria. Luminescência: fluorescência e fosforescência. Fluorescência: Diagrama de Jablonski. Fluoróforos. Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola

2 Energia Radiante – Radiação eletromagnética.
Velocidade da onda Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola

3 Espectro da radiação eletromagnética
Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola

4 Espectro da radiação eletromagnética
Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola

5 Natureza dualística - onda
Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola

6 Natureza dualística - partícula
Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola

7 Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola

8 Interação radiação EM-matéria: reflexão
Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola

9 Interação radiação EM-matéria: refração
Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola

10 Interação radiação EM-matéria: difração
Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola

11 Microscopia Confocal: Teoria e técnica
1. Energia radiante = Radiação eletromagnética Natureza da radiação eletromagnética Espectro eletromagnético. Natureza dual: onda/partícula 2. Fluorescência. Interação radiação eletromagnética-matéria. Luminescência: fluorescência e fosforescência. Fluorescência: Diagrama de Jablonski. Fluoróforos. 3. Microscopia de transmissão 4. Microscopia de fluorescência “wide-field” 5. Microscopia confocal 6. Técnicas especiais: proteínas de fusão. Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola

12 Luminescência – Fluorescência e fosforescência
Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola

13 Luminescência – Fluorescência e fosforescência
Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola

14 Fluoróforos de interesse em Biologia
Fluoresceína Quinina Rodamina Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola

15 Laser x HBO Espectro do He-Ne laser
Espectro da HBO (mercury-vapor high pressure arc lamp) Laser (Light Amplification by Stimulated Emission Radiation) Laser é um instrumento óptico-eletrônico que emite radiação coerente, em um feixe estreito, de baixa divergência, em um comprimento de onda definido (monocromático) Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola

16 Laser x HBO Espectro do He-Ne laser
Espectro da HBO (mercury-vapor high pressure arc lamp) Laser (Light Amplification by Stimulated Emission Radiation) Laser é um instrumento óptico-eletrônico que emite radiação coerente, em um feixe estreito, de baixa divergência, em um comprimento de onda definido (monocromático) Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola

17 Microscopia Confocal: Teoria e técnica
1. Energia radiante = Radiação eletromagnética Natureza da radiação eletromagnética Espectro eletromagnético. Natureza dual: onda/partícula 2. Fluorescência. Interação radiação eletromagnética-matéria. Luminescência: fluorescência e fosforescência. Fluorescência: Diagrama de Jablonski. Fluoróforos. 3. Microscopia de transmissão 4. Microscopia de fluorescência “wide-field” 5. Microscopia confocal 6. Técnicas especiais: proteínas de fusão. Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola

18 BCECF – pH indicator

19 BCECF images Fluorescence images Microscopia confocal, 2008
A. C. Cassola

20 Questões 1 Examine um eletródio de vidro para pH. Identifique o eletródio sensível e o de referência. Discuta este eletródio de referência (não-polarizabilidade). Depois meça as diferenças de potencial elétrico que o eletródio desenvolve em duas soluções, de pH 4.05 e Construa a curva de calibração par o sistema. Meça a voltagem em uma solução de pH a determinar. Determine a concentração de H+ nesta solução. 2. Considere duas soluções de KCl, de 100 mM e 10 mM. Suponha estas soluções em compartimentos separados por uma membrana seletiva, permeável apenas ao cátion. Qual será a diferença de potencial elétrico entre os dois compartimentos (Temperatura de 25⁰C). Aventure-se em considerações da interferência da capacitância de membrana sobre o desenvolvimento da diferença de potencial elétrico. 3. Suponha uma molécula que absorvesse fótons de uma dada energia (ħν) e emitisse radiação, relaxando ao estado basal, após alguns picosegundos (10-12s). Esta molécula poderia ser utilizada como fluorescente? 4. Discuta a estimativas de razão de fluorescência. Porque os indicadores que permitem medidas de razão são mais convenientes nas medidas intracelulares. Microscopia confocal, 2008 A. C. Cassola