Técnicas de microscopia de contraste

Apresentação em tema: "Técnicas de microscopia de contraste"— Transcrição da apresentação:

1 Técnicas de microscopia de contraste
Contraste : interações luz e matéria Técnicas de microscopia de contraste       Fluorescência; Luz polarizada; Contraste de fase; Campo escuro; Contraste interferencial. Em amostras que dão contraste de até 3%, estas técnicas melhoram o contraste, permitindo a visualização pelo olho humano.

2 Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria
Transmissão = luz + fluorescência – (absorção + refração reflexão) fluorescência refração absorção LUZ reflexão

3 Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria
Espectro de luz visível  (quanto maior o l, menor a energia)      

4 1ª interação ao entrar no tecido
dentro do tecido     i AR AR e/ou   = menor intensidade de luz transmitida  TECIDO TECIDO

5 Quais interações resultam nesta imagem?
Contraste : interações luz e matéria Quais interações resultam nesta imagem?

6 Propriedades fundamentais da luz - intensidade; - freqüência;
- coerência; - polarização. Onda Vetor campo elétrico E l 1 5 y 1,5 2 4 2 4 x 3 3 l/4 l/4 l/4 l/4 Polarização é a natureza vetorial da luz

7 Contraste : interações luz e matéria
Contraste: tipos de amostra 1) Amplitude: alteram a intensidade da luz transmitida. Amostras transparentes coradas causam o mesmo efeito. 2) Fase: não absorvem luz, mas causam mudança de fase nos comprimentos de onda que a atravessam. Amostra transparente Amostra tipo amplitude Amostra tipo fase Amostra tipo misto (maioria)

8 Interferência construtiva
Onda A Resultante Sem retardo de fase: amplitude aumentada Onda B Interferência construtiva Resultante Onda A Retardo de fase de 90º: amplitude reduzida Onda B Interferência construtiva Onda A Resultante Retardo de fase de 180º: amplitude zero Onda B Interferência destrutiva

9 Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria
Tipos de reflexão          regular difusa

10 Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria
reflexão regular; transmissão; absorção          

11 Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria
reflexão regular; pouca transmissão; absorção.          

12 Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria
reflexão regular; transmissão; absorção.          

13 Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria
Tipos de reflexão          Difusa Regular

14 Contraste : interações luz e matéria
Reações com a luz Transmissão         

15 Contraste : interações luz e matéria
Reflexão          1 4 5 2 3 6

16 Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria
Reflexão e Transmissão         

17 Contraste : interações luz e matéria
Reações com a luz Na face oclusal

18 Reações com a luz Contraste : interações luz e matéria Fluorescência
Fluorescência Aminoácidos fluorescentes - Tirosina; - Fenilalanina; - Triptofano. lexcit 275 nm 260 nm 295 nm lemiss 304 nm 282 nm 353 nm Compostos aromáticos fluorescentes porfirinas (sangue, pigmentos naturais, bactérias). lexcit nm lemiss 615 nm e 675 nm

19 Contraste : interações luz e matéria
Fluorescências dos tecidos dentais duros excit ótima emiss máx cromóforo Dentina# 380 nm 440 nm ? Esmalte# 280 nm 420 nm ditirosina Cálculo dental* 407 nm 604 e 656 nm hematoporfirina dicátion 416 nm 617 e 669 nm 431 nm 635 e 683 nm # Zijp, Optical propeties of hard dentasl tissues, Thesis, 2001; * Reis et al., Applied Spectr. 2001;

20 Contraste : interações luz e matéria
Fluorescências dos tecidos dentais duros Observar comportamento Gaussiano das curvas de fluorescência

21 Contraste : interações luz e matéria
Reações com a luz  Fluorescência