Giovana Giacomini.

Apresentação em tema: "Giovana Giacomini."— Transcrição da apresentação:

1 Giovana Giacomini

2 Introdução Trypanosoma cruzi Doença de Chagas 10 milhões Fase aguda
Fase indeterminada Fase crônica Doença de Chagas 10 milhões

3 Introdução Trypanosoma cruzi Grande diversidade genética classificação
RAPD (random amplified polymorphic DNA) MLEE (multilocus enzyme eletrophoresis) DTU (discrete typing unit) conjuntos de unidades populacionais geneticamente mais relacionadas entre si do que qualquer com outra população 6 DTUs Emergência de DTUs: recombinação IIa e IIc = I + IIb IId e IIe = IIb + IIc TCI TCII IIa, IIb, IIc, IId e IIe

4 Introdução Identificação dos DTUs é de alta relevância para estudos clínicos e epidemiológicos Exploração de possíveis ligações entre diversidade genética X pleomorfismo na severidade e sintomas Rastreamento molecular de populações silvestres Método discriminatório molecular simples e sensível

5 Aplicar a análise MLP à 12 loci gênicos
Objetivo Aplicar a análise MLP à 12 loci gênicos Genes envolvidos na relação hospedeiro-parasita devido a possível propensão à polimorfismos como uma resposta adaptativa à pressão seletiva imune Comparação com resultados obtidos por RAPD (validação taxonômica) e MLEE (aplicações práticas) Prova de evidência para aplicabilidade

6 Materiais e Métodos 20 cepas de T. cruzi
Amostras de sangue: 10 humanas e 21 outros mamíferos Amostras do conteúdo intestinal: 19 Mepraia spinolai

7 Materiais e Métodos PCR 12 genes GenBank: sequências correspondentes
Primer Premier PCR

8 Materiais e Métodos PCR-RFLP (Polymerase Chain Reaction Restriction Fragment-Length Polymorfism) Avaliar a diferença nas sequências de DNA Microchip (eletroforese capilar) Produto da PCR Clivagem por enzimas de restrição (Webcutter) Separação dos fragmentos Eletroforese em gel de agarose

9 Materiais e Métodos 1ª etapa: 6 cepas T. cruzi e T. cruzi marinkellei (“7-strain analysis”) Análise final: 1 enzima por marcador

10 Resultados 1ª etapa: 7-strain analysis 2ª etapa: 20 cepas
gp72 (TaqI) genótipos heterozigotos 1f8 (Alw21I) Sobreposição dos padrões dos supostos ancestrais

11 Resultados Polimorfismos entre DTUs Fragmentos únicos DTUs específicos
Combinações de características únicas

12 Resultados Polimorfismos intra-DTUs gp63 (TaiI)

13 Resultados Aplicação do PCR-RFLP em amostras de hospedeiros 1f8/Alw21I
IIa IIc IIa IIc + I IIb IId IIe + I IIb IId IIe + IIb IId IIe + I

14 Conclusões Concordância dos resultados encontrados com PCR-RFLP com a classificação baseada na MLEE e RAPD. Algoritmo para identificação de DTUs T. cruzi. - Análise MLP representou uma nova alternativa aos métodos moleculares existente. - Simples, discriminação em vários níveis, aplicado diretamente para amostras dos hospedeiros. - Ferramenta importante para estudos epidemiológicos e ações de controle.

15 Segunda Reunião Satélite – XXXVI Reunião Anual em Pesquisa Básica sobre a Doença de Chagas (Búzio, RJ – 2009) Fonte: Zingales et al., 2009

16 OBRIGADA!!!