SEQUENCIAMENTO DE DNA.

Apresentação em tema: "SEQUENCIAMENTO DE DNA."— Transcrição da apresentação:

1 SEQUENCIAMENTO DE DNA

2 SEQUENCIAMENTO DE DNA TÉCNICA PRÁTICA MÉDICA HOJE FUTURO

3 TÉCNICA: 1. EXTRAÇÃO DO DNA: A TÉCNICA VARIA DE ACORDO COM O MATERIAL. PROTEINASE DETERGENTES CENTRÍFUGA ETANOL

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5 PCR {DNA + PRIMER + dNTP + Taq polimerase 95o C : denatura
TÉCNICA 2. AMPLIFICAÇÃO PCR {DNA + PRIMER + dNTP + Taq polimerase 95o C : denatura 60o C: anelamento do primer e extensão da molécula pela taq polimerase

6 3. ANÁLISE E QUANTIFICAÇÃO DO MATERIAL AMPLIFICADO

7 TÉCNICA 4. MARCAÇÃO PCR { MATERIAL AMPLIFICADO + PRIMER+ dNTPs + ddNTPs MARCADOS + Taq polimerase A Taq pol pode adicionar também análogos dos nucleotídeos. O método de Sanger usa essa habilidade para incorporar ddNTPs à sequência. Quando um ddNTPs é incorporado à cadeia, a extensão termina seletivamente em A,C,G ou T devido a falta o grupo 3´OH.

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10 TÉCNICA 5. SEQUENCIAMENTO: o sequenciador automático detecta a fluorescência dos 4 diferentes ddNTPs marcados. As quatro cores podem ser detectadas isoladamente , graças a eletroforese capilar.

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13 PREVENÇÃO GENOTÍPICA

14 PREVENÇÃO FENOTÍPICA

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