UPCII M Microbiologia Teórica 15 2º Ano 2010/2011

Sumário Capítulo XIV. Diagnóstico Microbiológico Produtos biológicos para análise Colheita e transporte de amostras Identificação do agente infeccioso: Diagnóstico Directo Cultura e isolamento Caracterização do microrganismo Antibiograma Detecção da resposta imune T15 MJC 8-11-2011

Diagnóstico Microbiológico Paciente Pedido de Exame Colheita Transporte Laboratório Resultado Interpretação Diagnóstico e Terapia Epidemiologia Biologia e Patogenia T15 MJC 8-11-2011

Sensibilidade e Especificidade + - Presença do Microrganismo Verdadeiro (V+) Falso (F-) Ausência do Microrganismo (F+) (V-) 8-11-2011 T15 MJC

Colheitas a partir de: Excreções Secreções Tecidos Órgãos 8-11-2011 T15 MJC 8-11-2011

Colheita e Transporte das amostras Anaeróbios / Fastidiosos / Vírus Psicrófilos / Mesófilos Colheitas de locais com MI Contaminação do ambiente (Espectoração e saliva) Meio de recolha  Eficácia Meio de transporte Antibioterapia precedente Tempo da colheita /Rota de infecção e ciclo de infecção Tempo de espera para processamento 8-11-2011 T15 MJC

Análise laboratorial Directamente (1) Após cultura (2) Presença de antigénios (A) Presença de sequências genómicas (B) Após cultura (2) Pesquisa e identificação da toxina T15 MJC 8-11-2011

Cryptococcus neoformans 1 – Observação directa Ovos de helmintas Espiroquetas Cryptococcus neoformans Preparação Tzanck (infecção por vírus herpes simplex ou varicella-zoster) 8-11-2011 T15 MJC

1 - Observação directa - Colorações A= Não acid fast B=Acid Fast Fluido CerebroEspinal Bacillus antracis T15 MJC 8-11-2011

1 - Observação directa – Microscopia electrónica T15 MJC 8-11-2011

1 - Observação directa – Imunocitoquímica T15 MJC 8-11-2011

1 - Observação directa – Sondas moleculares T15 MJC 8-11-2011

Condições 2 - Cultura Meios de Cultura: Função? Meios de transporte: Função? Incubação: (Temperatura e oxigénio) T15 MJC 8-11-2011

Desconhecido Tecidos estéreis Microflora Normal 2 - Cultura Reacções com o meio de cultura Desconhecido Tecidos estéreis Streptococcus beta hemolítico Microflora Normal T15 MJC 8-11-2011

Identificação vs Distinção 2 - Cultura Após cultura segue-se identificação: Tipagem: Serotipagem Biotipagem Tipagem de fagos Tipagem de bacteriocinas Multiloccus enzyme electrophoresis (MLEE) Pulse Field Gel Electrophoresis (PFGE) Restriction Fragment Lenght Polymorphism (RFLP) Ribotyping Identificação vs Distinção T15 MJC 8-11-2011

2 – Cultura – Permite antibiograma T15 MJC 8-11-2011

A – Detecção de antigénios 8-11-2011 T15 MJC

A – Detecção de antigénios Que proteínas? Detecção de Proteínas 8-11-2011 T15 MJC

B- Detecção de sequências genómicas Detecção de ácidos nucleicos PCR T15 MJC 8-11-2011

B- Detecção de sequências genómicas PCR T15 MJC 8-11-2011

B- Detecção de sequências genómicas PCR Visualização O que indica? Utilização noutras técnicas T15 MJC 8-11-2011

B- Detecção de sequências genómicas Detecção de ácidos nucleicos RT-PCR (Real Time) RT-PCR (Reverse Transcription) Multiplex PCR Nested PCR T15 MJC 8-11-2011

B- Detecção de sequências genómicas Detecção de ácidos nucleicos Sondas moleculares FISH T15 MJC 8-11-2011

3 – Resposta imunitária Tradicionais Medem a resposta humoral pela actividade dos anticorpos Aglutinação 8-11-2011 T15 MJC

3 – Resposta imunitária Tradicionais – Reacção de aglutinação 8-11-2011 T15 MJC

3 – Resposta imunitária Activação do complemento 8-11-2011 T15 MJC

3 – Resposta imunitária Mais Recentes – Imunoensaios enzimáticos Medem a resposta humoral pela presença dos anticorpos 8-11-2011 T15 MJC

3 – Resposta imunitária 8-11-2011 T15 MJC

3 – Resposta imunitária T15 MJC 8-11-2011

Bibliografia Capítulo 6 Capítulo 17 T15 MJC 8-11-2011