HEPATITE A Laboratório - Técnicas e Fluxos Aula ministrada por: CLÁUDIA PATARA SARACENI Laboratório de Hepatites Serviço de Virologia - IAL em 03.06.2002

Descoberta do VHA há mais de 2000 anos relatos de casos início do Sec. 20 - “hepatite infecciosa” 1947 - introdução dos termos hepatite A e B, que foram posteriormente adotado pela OMS estudo realizado em instituição para deficientes mentais - agente MS1 1973 - inoculação em voluntários com esta linhagem Feinstone e cols. conseguiram visualizar o vírus nas fezes por imunomicroscopia eletrônica 1979 - Provost e Hilleman cultivo do VHA em cultura de células Família Picornaviridae Gênero Hepatovirus

Classificação do VHA início da década de 80 - Família Picornaviridae, provisoriamente enterovírus tipo 72. ácido nucleíco - RNA tamanho (27 a 32 nm) não-envelopado simetria icosaédrica estrutura do genoma replicação viral

VHA X outros Picornavirus Classificação do VHA VHA X outros Picornavirus 1. seqüência de aminoácidos e nucleotídeos, e tamanho das proteínas diferentes 2. cresce com dificuldade em cultura de células, sem induzir efeito citopático 3. é mais resistente à temperatura e às drogas 4. possui apenas um sorotipo e um único local de neutralização imunológica 5. não reage contra um anticorpo monoclonal específico para enterovírus Gênero Hepatovirus

Estabilidade do VHA estabilidade relativamente alta em estudos experimentais, manteve a infectividade: água e solo até 3 mês a 25oC superfícies inertes 1 mês a 25oC resistência ao calor vários anos a -20oC 1 hora a 60oC resistente aos desinfetantes mais comuns: éter, clorofórmio, Freon no ambiente, viável dias até meses: água, água do mar, ostras, verduras

Inativação do VHA fervura a 100oC por 1 minuto radiação ultravioleta etanol 70% a 25oC por 60 min hipoclorito de sódio (1:100) autoclave 121oC por 20 min

Diagnóstico exame clínico provas de função hepática sorologia transaminases bilirrubinas fosfatase alcalina gama-glutamiltransferase sorologia marcadores virais específicos

Transaminases marcadores bioquímicos mais utilizados: marcadores sensíveis de lesões do fígado; atingem picos elevados no início dos sintomas valores de referência homens, mulheres, crianças e > 60 anos kits / laboratório x L.S.N.: no de vezes acima do limite superior normal

Transaminases ALT - alanina aminotransferase TGP - transaminase glutâmico pirúvica AST - aspartato aminotransferase TGO - transaminase glutâmico oxalacética

hepatites virais: ALT>AST Transaminases mais específica, principal/e no fígado exclusivamente citoplasmática fígado, coração, músculo, rins citoplasma e mitocôndria ALT AST hepatites virais: ALT>AST

Fatores que podem causar alterações: Transaminases Fatores que podem causar alterações: hora do dia - ALT pode variar até 45% durante o dia entre os dias - ALT 10 a 30% de variação AST 5 a 10% de variação raça e gênero - AST 15% mais alta em afro-americanos exercício - AST principalmente (3x) ALT mais baixo (20%) nos que fazem exercício regular/e IMC - ALT e AST mais altas (40 a 50%) em indivíduos com IMC mais alto

Bilirrubinas pigmento biliar aumentos são específicos de doenças do fígado e das vias biliares bilirrubina total, direta e indireta valores de referência variam com gênero e idade hepatites virais: BD>BI

Fatores que podem causar alterações: Bilirrubinas Fatores que podem causar alterações: hora do dia - pode variar 15% a 30% durante o dia ingestão de alimentos raça - mais baixa em afro-americanos (33% homens;15% mulheres) luz - cai 50% em 1h de exposição gestação - cai 33% no segundo semestre

Diagnóstico Específico Pesquisa do vírus Pesquisa de anticorpos

Pesquisa do vírus imunomicroscopia eletrônica fezes técnicas de biologia molecular soro

Pesquisa de anticorpos anti-VHA IgM marcador de infecção recente anti- VHA IgG conferem imunidade duradoura marcador soroepidemiológico indicador de contato prévio

Pesquisa de anticorpos amostra clínica soro saliva papel de filtro - polpa digital

SORO Coleta Transporte Conservação colher em tubo com gel separar o soro dentro de 4 horas Transporte sangue - T ambiente soro - no gelo Conservação geladeira até a realização do ensaio

Pesquisa de anticorpos Testes utilizados 1a geração reação de fixação de complemento 2a geração hemaglutinação 3a geração - imunoensaios radioimunoensaio ELISA

Determinação qualitativa do anti-VHA IgM ELISA Determinação qualitativa do anti-VHA IgM anti-VHA monoclonal peroxidase cromógeno/ substrato E ac - soro VHA fase sólida ac anti igM conjugado ELISA por Captura

Eventos clínicos e sorológicos Hepatite A Eventos clínicos e sorológicos sintomas anti-HAV IgG VHA nas fezes ALT Título anti-HAV IgM 1 2 3 4 5 6 12 24 Meses após a exposição

Surto de hepatite A em Vargem Grande Paulista Bairro de Tijuco Preto 27 de janeiro a 15 de março INVESTIGAÇÃO DE CAMPO visita aos domicílios, escolas, local de trabalho 55,1% das solicitações atendidas problemas com a coleta

Surto de hepatite A em Vargem Grande Paulista idade variou de 1 a 23 anos, 70% <10 anos total 18 casos: 8 assintomáticos 10 sintomáticos (médias): bilirrubina total: 4,6 mg/dl (0,5 - 14,8) direta: 3,4 mg/dl (0,1 -11,4) indireta: 1,3 mg/dl (0,3 - 3,4) ALT: 11,8 x L.S.N. (0,4 - 38,1)