Análise da expressão e função de uma possível proteína desacopladora em Rhodnius PROLIXUS Vinicius de Lima

Introdução O modelo de estudo: Inseto hematófago obrigatório Hemíptero da família Reduviidae e subfamília Triatominae Importância para a saúde pública mundial – Transmissor do T. cruzi.

Idéia geral do funcionamento da UCP Introdução Idéia geral do funcionamento da UCP

Introdução UCP em rhodnius prolixus Alimentação sanguínea = muitos ROS Teoria dos vampiros UCP seria uma adaptação ao estresse oxidativo?

introdução UCP na termogênese Descrita em vários organismos como uma proteína termogênica Poderia esta ser responsável pela geração de calor em órgãos tais como o músculo de vôo?

Metodologia Genômica Busca do(s) gene(s) para UCP no genoma de Rhodnius prolixus usando seqüências de UCP de outros insetos Montagem do gene usando o algorítimo GeneWise Confirmação filogenética usando o programa MEGA 4.

metodologia Experimentos de bancada: Elaboração de iniciadores específicos para UCP de Rhodnius prolixus RT-PCR – Confirmação da expressão gênica em determinados órgãos -> Alvos como Intestino médio posterior, corpo gorduroso e músculo de vôo

metodologia RT-qPCR para análise de quantificação da expressão gênica Fabricação de um peptídeo sintético a partir da seqüência de UCP e posterior síntese de anticorpo policlonal Western Blotting / imunohistoquímica nesses órgãos analisados sob situação de jejum, alimentação sanguínea e vôo. RNAi – Análise de fenótipo por microscopia de fluorescência: marcação de ROS Calorimetria do músculo de vôo

Resultados e conclusões esperadas Rhdnius prolixus possuirá UCP em seu genoma. Essa(s) UCP(s) deve(m) ser expressa(s) nos três órgãos analisados. Suas expressões tanto gênicas quanto protéicas devem sofrer regulações em função do estado fisiológico do inseto

Resultados e conclusões esperadas UCP deve proteger, principalmente os intestinos, de um estresse oxidativo mediado pela presença do grupo Heme UCP deve aumentar a produção de calor no músculo de vôo e sem esta o vôo deve ser comprometido Ausência de UCP deve resultar em possível morte ou não postura de ovos

Publicação Em dois anos: Insect Biochemistry and Molecular Biology, Journal of Insect Science, Isect Physiology ou Journal of Biological Chemistry