CROMOSSOMOS HUMANOS IVANISE C.S.MOTA

O Ciclo Celular

Compactação do Material Genético

Mitose Prófase Metáfase Anáfase Telófase Célula mãe A cromatina condensa-se em cromossomos e a carioteca é desfeita Alinhamento dos cromossomos Separação das cromátides irmãs Descondensação das cromatinas, divisão do citoplasma Duas células filhas Anáfase Telófase Metáfase Prófase

Padronização Cariotípica Conferências: Denver (1960) Londres (1963) Chicago (1966) Paris (1971,1975) ISCN (1978 a 1995)

Conferência de Denver (1960) Propostas Classificação básica para cromossomos mitóticos humanos Divisão em 7 grupos, distribuídos de acordo com tamanho e morfologia p q

Conferência de Londres (1963) Propostas Os 7 grupos foram denominados com letras(A a G) Descrição morfológica detalhada dos grupos A, C, D, E e G

Conferência de Chicago (1966) Propostas Regras para a descrição do cariótipo (fórmula cariotípica) Criação dos símbolos utilizados na descrição de cariótipos normais e anormais, em coloração convencional 46,XX mulher 46, XY homem 47,XY+21 - homem, trissomia do 21 45,X0 - mulher com Síndrome de Turner

Sangue Periférico Protocolos otimizados Microcultura e macrocultura linfócito Protocolos otimizados Microcultura e macrocultura Cultura a curto prazo - 48 a 72h Cultura a longo prazo - 92h Pouco invasivo

Meio de Cultura RPMI 1640 Fitohemaglutinina Soro fetal bovino Penicilina Estreptomicina L-Glutamina Colchicina

Rotina Citogenética

Diante da cultura efetivada realiza-se a técnica de squash, a qual consiste de gotejar o material cultivado sobre uma lâmina de vidro (com um breve afastamento para ação da gravidade). Observa-se a metáfase mais apropriada para avaliação, fotografa, amplia e realiza o cariótipo simples. Caso seja solicitação de Cariótipo por bandeamentos cora-se o material com a banda adequada e posteriormente realiza-se o cariótipo. Obs.: A técnica de bandeamento refere-se a frações sensíveis a corantes expostos e não a frações gênicas.

Classificação dos cromossomos Metacêntrico → Centrômero posicionado no centro do cromossomo; Submetacêntrico → Centrômero deslocado para uma das extremidades do cromossomo; Acrocêntrico → Cromossomo portador de uma esfera terminal (satélite), localizada na extremidade do braço curto; Telocêntrico → Cromossomo formado por apenas um braço, com centrômero estritamente terminal. Classificação dos cromossomos

Classificação Universal de Denver Grupos Morfologia Pares A Grandes - Metacêntricos ou Submetacêntricos 1 a 3 B Grandes – Submetacêntricos 4 e 5 C Médios – Submetacêntricos 6 a 12 – X D Médios -Acrocêntricos 13 a 15 E Pequenos – Metacêntricos ou Submetacêntricos 16 a 18 F Pequenos – Metacêntricos 19 e 20 G Muito Pequenos – Acrocêntricos 21 e 22 -Y

Bandeamento G Os cromossomos são inicialmente tratados com tripsina, para a desnaturação das proteínas cromossômicas e em seguida são corados com o corante Giemsa. Identificação dos Cromossomos

Bandeamento GTG Permitiu o pareamento cromossômico Localizar o local afetado Identificar bandas claras e escuras

Bandeamento GTG Tripsina 5% NaCl 100% Giemsa 4% dH2O

Identificação dos Cromossomos Bandeamento Q Os cromossomos são tratados com mostarda de quinacrina ou compostos semelhantes e, em seguida, examinados por microscopia de fluorescência. Os cromossomos coram-se num padrão específico de bandas brilhantes e opacas Identificação dos Cromossomos

Identificação dos Cromossomos Bandeamento R Os cromossomos recebem pré-tratamento com calor antes da coloração Giemsa. Nesse caso, as bandas claras e escuras resultantes são o inverso das produzidas por bandeamento G. Bandeamento C Envolve a coloração da região centromérica de cada cromossomo e outras regiões que contenham heterocromatina. Identificação dos Cromossomos

Identificação dos Cromossomos Bandeamento de alta resolução Esse tipo de bandeamento cora cromossomos preparados num estágio inicial da mitose (prófase ou prometáfase) que estão ainda em uma condição relativamente não-condensada. Citogenética molecular Podem-se usar sondas de DNA específicas para cromossomos ou regiões cromossômicas particulares ou diagnosticar rapidamente a existência de um número anormal de cromossomos no material clínico. Identificação dos Cromossomos

Banda NOR Identificação cromossômica mediante o uso de nitrato de prata. Autoradiografia Os cromossomos são identificados mediante a eliminação de substâncias radiotivas expelidas. É prejudicada a visualização em detrimento de não haver homeostasia celular.

Análise Citogenética Indicação Clínica Tipo de Amostra Qualidade do material Experiência do analista Recursos de análise

Sangue periférico e biópsia de pele Tipos de Amostras Sangue periférico e biópsia de pele Contagem: 15-20 células Análise: 4-5 células Cariótipo: 2 células linfócito fibroblastos

Tipos de Amostras Medula Óssea Contagem: 15-20 células Análise: 4-5 células Cariótipo: 2 células

Tipos de Amostras Líquido Amniótico Cultura em frascos Contagem: 15-20 células de duas culturas Análise: 4-5 células Cariótipo: 2 células AMNIONCENTESE

Vilosidades Coriônicas Tipos de Amostras Vilosidades Coriônicas Direto Contagem: 15-20 células, se possível Análise: 4-5 células, se possível Cariótipo: 2 células (1 de cada teste) Cultura Contagem: 15-20 células (de cada cultura) Análise: 4-5 células Cariótipo: 2 (de cada cultura)

Tipos de Amostras Células Tumorais Contagem: Não se recomenda apenas a contagem sem a análise completa da célula Análise: 15-20 células Cariótipo: 2 células

Métodos e Ferramentas de Análise

Métodos e Ferramentas de Análise Axioplan-Imaging® Carl Zeiss

Aspectos Metodológicos e Aplicações Cromossomo: 1 Braço: Curto Região: 2 Banda: 2 Sub-banda:2

Ex.: 6p21.3 – Síndrome de Marfan – HAD (fibrilina – 15) Componente Explicação 6 Número do cromossomo. p Encontra-se no braço curto do cromossomo (p); 21.3 O número seguinte a letra representa a posição no braço: banda 21, sub-banda 3. As bandas são visíveis ao microscópio quando o cromossomo está devidamente corado. Cada banda é numerada sendo a número 1 a mais próxima do centrômero. Sub-bandas e sub-sub-bandas são visíveis a resoluções mais altas. Ex.: 6p21.3 – Síndrome de Marfan – HAD (fibrilina – 15)