METABOLISMO BACTERIANO (PROVAS BIOQUÍMICAS)

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1 METABOLISMO BACTERIANO (PROVAS BIOQUÍMICAS)
Nome: Meyre Elisa de Lima Marcelly Stefani Jéssica Cristina de Lima

2 A investigação das atividades metabólicas das bactérias “in vitro” é chamada de Provas Bioquímicas e servem para auxiliar o microbiologista a identificar grupos ou espécies Para a realização das provas bioquímicas é necessário utilizar meios de cultivo especiais contendo o substrato a ser analisado e fornecer ao microrganismo as condições nutritivas e ambientais necessárias ao seu desenvolvimento.

3 Prova da citocromo-oxidase
Esta prova permite distinguir grupos de microrganismos, base a atividade da enzima citocromo oxidase, que está relacionado com os citocromos da cadeia respiratória de alguns microrganismos. Papel importante no sistema de transporte de elétrons durante a respiração aeróbia Citocromo + Oxigenio Citocromo oxidado +H2O Distinguir grupos de bacilos Gram negativo patogênicos. catalisa

4 A capacidade das bactérias produzirem esta enzima pode ser determinada pela adição do reagente das oxidases (dihidrocloreto de tetrametil p-fenilenodiamina) Assim, a prova consiste em colocar uma gota do reagente incolor tetrametil p-fenilenodiamina, recém preparado e protegido da luz, em um papel de filtro. Em seguida, várias colônias do microrganismo em estudo são espalhadas sobre a área do papel de filtro contendo o reagente, utilizando uma alça de platina ou um bastão de vidro.

5 Positiva: massa bacteriana desenvolve a cor púrpura em até 1 minuto
Positiva: massa bacteriana desenvolve a cor púrpura em até 1 minuto. (desenvolvimento de cor rósea, marrom e finalmente uma coloração negra na superfície das colônias é indicativa da produção de citocromo-oxidase) Negativa: não há desenvolvimento de cor púrpura.

6 Princípio de técnica: detecção da produção de indofenol (citocromo-oxidase).
Tiras de papel absorvente impregnadas com p-fenilenodiamina, acondicionadas em frasco escuro e opaco contendo agente dessecante. Frascos com a tiras em temperatura ambiente, antes de abrir. Perto da chama, abrir, e retirar as tiras com a pinça, e analisar no microscópio. transferir assepticamente uma ou duas colônias da bactéria em análise e emulsionar sobre a superfície da tira Observar por 2 minutos, coloração violeta, resultado positivo

7 IMPORTANTE Não utilize nenhum tipo de alça ou bastão que contenha vestígios de ferro, pois este irá catalisar a reação de oxidação do reagente, resultando em reação falso-positiva. Na mesma fita, faça controle positivo com Pseudomonas aeruginosa e controle negativo com E. coli.

8 Leitura: ß Oxidase (+): O esfregaço bacteriano na fita apresenta coloração rosa, que após alguns minutos pode mudar para preta. ß Oxidase (–): O esfregaço bacteriano não apresenta alteração de cor.

9 Microorganismos identificados:
Utilizado para diferenciar o gênero Neisseria (oxidase negativo) de outros cocos Gram negativos (oxidase positivo) e para diferenciar a família enterobacteriaceae (oxidase negativo) dos outros bacilos Gram negativos (oxidase positivo).

10 Referências: Metabolismo microbiano: provas bioquímicas. Disponível em: Tiras de oxidase. Disponível em: Identificação de bactérias. Disponível em: