Análise de Aminoácidos em formulados de BCAA

Apresentação em tema: "Análise de Aminoácidos em formulados de BCAA"— Transcrição da apresentação:

1 Análise de Aminoácidos em formulados de BCAA
Data de Apresentação: 26/10 - tarde Análise de Aminoácidos em formulados de BCAA Rafael Assunção de Cubas1, Letícia Ariane Costa Batista1, Lucielle Pabline Silva Inacio1, Juliana Ferreira1, Letìcia Fidelix de Sousa1, Joäo Victor dos Santos Bonfim1, Henrique Fernandes Bezerra1 Victor Hugo Petry1, Suzane Beatriz Freire1 Rayssa Rayane Melges1 Renata  Pascoal Illanes Tormena2 e Maria Hosana Conceição2. 1. Estudantes de IC/EM; 2. Laboratório de Química /UnB/FCE. Introdução Resultados Os aminoácidos essenciais como a L-leucina, L-isoleucina e L-valina, são chamados de “ Branched Chain Amino Acids”, BCAA (Wikipedia 2016). Essa denominação, do inglês, se refere a aminoácidos que possuem o grupo R da cadeia lateral na forma ramificada. Esses aminoácidos fazem parte das preparações de suplementos alimentares e estão disponíveis no comércio na forma de diferentes formulados. O uso da cromatografia em camada fina, do inglês, “ Thin Layer Chromatography, TLC, tem sido empregada para determinar, qualitativamente, BCAAs em amostras biológicas (Allen and 1972, Degterev and Podgornova 1978, Ruiz-Canela, Toledo et al. 2016). Por outro lado, diversos pesquisadores têm se preocupado em utilizar a TLC como uma técnica também de quantificação (Degterev and Podgornova 1978). Degterev e colaboradores padronizaram um método para quantificar os aminoácidos L-leucina e L-isoleucina em amostras de fluidos de cultura. Naquele trabalho, foram estudadas as diferentes misturas de eluentes que possibilitou a separação desses aminoácidos utilizando uma placa cromatográfica (Degterev and Podgornova 1978). Figura 1. Curvas padrão dos aminoácidos valina e leucina. Objetivos Quantificar os aminoácidos valina e leucina com um método mais acessível e preciso, utilizando as fotos dos cromatogramas e a contagem de pixels de cada mancha através de programas de computação, disponíveis em quaisquer computadores, possibilitando praticidade e economia, sem perder a precisão dos dados; Preparar soluções de amostras comerciais de BCAA e quantificar os aminoácidos valina e leucina em um método já conhecido, mas com novas abordagens, adaptando antigos métodos com a nova tecnologia. Figura 2. Cromatograma: da esquerda para a direita: solução aquosa de leucina, solução aquosa de valina e solução aquosa do BCAA . Cálculo Simplificado dos pixels das manchas: Metodologia 1. Primeiramente foi utilizado o programa Paint para determinar a área da mancha, utilizando o recurso da grade de pixels, onde foi possível determinar a quantidade de pixels pertencentes à mancha. 2. Após determinar a quantidade de pixels, foi necessário remover o erro do programa que não diferencia os pixels próximos à mancha, para isto, foi utilizada uma grade para corrigir o cálculo de área irregular, pela delimitação da área da mancha em um retângulo. 3. Posteriormente, foi usado um quadrado de 5x5 pixels, para remover os pixels não pertencentes à mancha, o qual permitiu calcular o número de grades de 5x5 pixels utilizadas na sobreposição aos pixels não pertencentes à mancha. 4. Após calcular a área retangular da mancha, subtrairam-se os pixels não pertencentes à mancha, restando apenas os pixels da mancha, obtendo assim um valor mais exato dos pixels. 5. Calculou-se o resultado final como exemplo de V1: 82x78 Pixels, total 6396 pixels, com correção de área irregular (-975) = 5421, sendo possível quantificar manchas de cromatografia a partir de pixels. Inicialmente, através de leituras de textos e teorias demonstradas em laboratório, os alunos tomaram conhecimento do tema de cromatografia de camada delgada. Posteriormente, com o auxílio do roteiro de práticas, foi possível preparar as soluções padrão dos aminoácidos valina e leucina, utilizando volumes conhecidos dos aminoácidos foram aplicados na folha cromatográfica, com o auxílio de uma pipeta de precisão. 3. A folha cromatográfica foi transferida para uma béquer contendo alguns mililitros da mistura de solventes, água, ácido acético e butanol. (esse procedimento foi realizado na capela, devido aos vapores irritantes da mistura eluente). 4. Após alguns minutos a folha cromatográfica foi retirada e secada ao ar. Os aminoácidos foram revelados borrifando uma solução alcoólica de ninidrina. 5. Após a revelação das manchas, a placa cromatográfica foi fotografada e, utilizando um método de quantificação de pixels por área, foi possível calcular os pixels de cada mancha. Conclusão e Perspectivas O método proposto para a quantificação dos aminoácidos presentes no BCAA está sendo validado. Os resultados preliminares mostraram-se que é possível quantificar pela contagem de pixels, os aminoácidos valina e leucina. Por outro lado, devemos acrescentar ao método, a isoleucina e otimizar as condições cromatográficas. Os estudantes e a professora agradecem o apoio da: Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal – FAPDF Universidade de Brasília.