ESPECTROFOTOMETRIA Bioquímica.

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1 ESPECTROFOTOMETRIA Bioquímica

2 ESPECTROFOTOMETRIA Medida de absorção ou transmissão de luz — é uma das mais valiosas técnicas analíticas amplamente utilizadas em laboratórios. Por meio da espectrofotometria, componentes desconhecidos de uma solução podem ser identificados por seus espectros característicos ao ultravioleta, visível, ou infravermelho.

3 ESPECTROFOTOMETRIA Quando um feixe de luz monocromática atravessa uma solução com moléculas absorventes, parte da luz é absorvida pela solução e o restante é transmitido. A absorção de luz depende basicamente da concentração das moléculas absorventes e da espessura da solução – caminho óptico.

4 A intensidade da cor de uma solução é proporcional à concentração das moléculas absorventes de luz. Quanto mais concentrada for a solução, maior será a absorção de luz. Por outro lado, a cor da solução é determinada pela cor da luz transmitida.

5 Uma solução aparece como branca porque transmite luzes de todas as cores; quando absorve luzes de todas as cores, a solução é preta. Finalmente, a solução é verde quando absorve luz vermelha e transmite luz verde (amarelo + azul), a qual é denominada luz complementar.

6 ESPECTROFOTÔMETRO A luz é fornecida por uma lâmpada, fracionada pelo prisma ou rede de difração (monocromador) nos comprimentos de onda que a compõem. O comprimento de onda selecionado é dirigido para a solução contida em uma cubeta. Parte da luz é absorvida (absorbância) e parte é transmitida (transmitância). A redução da intensidade luminosa é medida pelo detector célula fotelétrica - o sinal elétrico de saída do detector depende da intensidade da luz que incidiu sobre ele. O sinal elétrico amplificado e visualizado no galvanômetro em números, é lido como uma absorbância e é proporcional à concentração da substância absorvente existente na cubeta.