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AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism)
Universidade Federal de Pelotas Genômica II Profª Fabiana K. Seixas Discentes: Carolina Georg Magalhães Drielly Braite Fernanda E. Valiati Fernanda M. Rodrigues Mariana Brutschin
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AFLP Técnica derivada da PCR utilizada para a definição de marcadores moleculares e detecção de polimorfismos; Revela variabilidade a nível de DNA; Técnica de DNA fingerprinting.
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Princípio Amplificação seletiva por PCR de um subconjunto de fragmentos derivados da digestão total do DNA genômico pelo uso de uma combinação de enzimas de corte raro e de corte frequente que clivam a molécula em sítios específicos.
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Metodologia A técnica é realizada em três etapas:
1. Digestão do DNA pelas enzimas de restrição e a ligação de adaptadores 2: Amplificação Pré-amplificação Amplificação seletiva 3: Análise do gel
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Metodologia
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Metodologia Combinação de enzimas: DNA amostral:
Importante para garantir a digestão completa da molécula de DNA, uma vez que uma digestão parcial pode levar à caracterização de falsos polimorfismos. Enzimas de corte raro: EcoRI, AseI, HindIII, ApaI e PstI Enzimas de corte frequente: MseI e TaqI DNA amostral: Precisa ter alta pureza, o que é essencial para que ocorra a digestão total do DNA genômico, sendo necessário o uso de um excelente método de extração e quantificação do DNA.
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Metodologia
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Metodologia Pré-amplificação
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Amplificação seletiva
Metodologia s Amplificação seletiva
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Metodologia - Análise final feita através de eletroforese em gel de policrilamida corado com nitrato de prata; - Polimorfismo detectado pela presença ou ausência de determinada banda
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Aplicações Genética forense Teste de paternidade
Diagnóstico de doenças hereditárias Construção de mapas genéticos
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Vantagens Grande poder de detecção de variabilidade genética;
Não é necessário o conhecimento prévio da informação de sequências-alvo ; Sensível; Rápido; Simples.
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Obrigada
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