Método Analítico para controle de qualidade microbiológico de produtos estéreis – TESTE DE ESTERILIDADE Conceitos Método de inoculação direto Método de inoculação Indireto

TESTE DE ESTERILIDADE Requisito Esterilidade é imprescindível para : Produtos injetáveis, Preparações oftálmicas Produtos para a saúde (Implantes cirúrgicos, suturas, seringas, agulhas descartáveis, etc) É uma metodologia analítica microbiológica usualmente empregada nestes produtos e está descrita em diversas farmacopéias, tais como a brasileira, americana, européia, britânica, entre outras.

TESTE DE ESTERILIDADE Finalidade: - Avaliar a ausência de microrganismos viáveis em produtos que foram submetidos a algum processo de esterilização, durante sua fabricação. - Verifica a qualidade do processo de esterilização empregado durante a fabricação de produtos farmacêuticos estéreis.

TESTE DE ESTERILIDADE Condições de trabalho: a) Área para realização do teste / Qualidade do ambiente: Deve ser realizado em sala pequena, com controle de ar (Sala limpa) para evitar contaminação do teste – resultado falso positivo. Na sala limpa, realizar o teste em capela com fluxo laminar horizontal. b) Analistas Devem ser treinados para o trabalho de técnicas assépticas Correta paramentação

TESTE DE ESTERILIDADE Amostragem de acordo com a FB IV – 1988 Sólido Número de amostras : no mínimo 20 unidades ou 10% do número de unidades que constituem o lote. b) Matéria- prima √ N (raiz quadrada de N), onde N= número de recipientes do lote. c) Amostragem de líquido ( ver tabela) Algodão purificado, bandagem, gaze e materiais relacionados 2 porções,da parte mais interna da amostra ( 100 – 500 mg) Embalagens individuais: 2 porções de 250 - 500mg ou 2 unidades totais.

TESTE DE ESTERILIDADE Preparo da amostra: Para evitar resultados falsos, deve-se tomar alguns cuidados, como: Desinfecção da superfície externa ( frasco, ampola, etc) , através da nebulização ou imersão em soluções anti-sépticas. Aguardar a remoção do agente químico. As embalagens devem ser abertas somente no momento da inoculação. Identificação das amostras , para evitar misturas.

TESTE DE ESTERILIDADE 1 ) Método direto / Inoculação direta 2) Método indireto / Inoculação indireta

TESTE DE ESTERILIDADE Metodologias empregadas: Método direto: A amostra é diretamente inoculada no meio de cultura. Meio de cultura Líquido Sólido (a amostra é semeada sob a superfície sólida do meio) Amostras de produtos líquidos: transferência com auxilio de pipeta, seringa ou diretamente vertido no recipiente Amostras de produtos sólidos: transferência direta ( uso de espátula) ou diluição com solução estéril.

Limitações do método direto TESTE DE ESTERILIDADE Produtos correlatos: Nem sempre é possível a introdução da amostra no frasco ( devido ao tamanho do material). Neste caso, o líquido de lavagem da superfície interna ou de ambas será transferido para o meio de cultura. Limitações do método direto Amostragem restrita / pequena Aprovação de lote contaminado Risco de inibição do cresc. de m.o ( residual de agente antimicrobiano)

TESTE DE ESTERILIDADE Cuidados que devem ser tomados no método direto: Deve-se tomar cuidado com amostras de materiais que possuem conservantes / substâncias antimicrobianos: resultado falso- negativos. Produtos que contenham conservantes / agentes antimicrobianos: Diluição da amostra – Concentração do agente inibidor seja menor que a concentração mínima inibitória. b) Adição de agentes inativadores específicos – inativam o conservante / agente inibidor da amostra.

TESTE DE ESTERILIDADE 2) Método indireto ou por filtração: Baseia-se na filtração da amostra em membrana estéril. O filtro é transferido assepticamente para o meios de cultura específicos. Foi primeiramente utilizado para produtos que continham conservantes / agentes antimicrobianos , os quais não podiam ser inativados para inoculação por método direto. Membranas filtrantes : escolhida de acordo com o material a ser testado e sem afinidade pelo agente antimicrobiano. Mais utilizada: Membrana composta por ésteres de celulose

Método indireto ou por filtração:

TESTE DE ESTERILIDADE Vantagem do Método indireto : Como o produto não entra em contato com o meio de cultura, a preocupação com resultado falso negativo, devido a presença de agentes inibidores, torna-se menor. Desvantagem: Porém, neste método, há maior manipulação da amostra, podendo ocasionar resultados falso-positivos.

TESTE DE ESTERILIDADE 3) Método indireto por sistema fechado Steritest® : sistema fechado para teste de esterilidade em produtos farmacêuticos Não há manipulação da membrana filtrante Diminui-se os riscos de contaminação durante o teste

TESTE DE ESTERILIDADE Método indireto por sistema fechado Vantagens: Facilidade operacional. Menor risco de resultados falso-positivos. Maior representatividade estatística. Abrangência a produtos com grande s volumes – 1ml até 5L.

Ex.:Caldo Tioglicolato, Caldo caseína soja, Caldo Sabouraud TESTE DE ESTERILIDADE Meios de cultura: Geralmente são empregados meios líquidos (caldos) para crescimento de bactérias mesófilas, psicrófilas, fungos e leveduras. Utilizam-se no mínimo 2 meios de cultura, porém, algumas farmacopéias recomendam de 3 a 4 tipos de meios diferentes. Ex.:Caldo Tioglicolato, Caldo caseína soja, Caldo Sabouraud Tempo de incubação: 14 dias , de acordo com a FB IV edição (1988)

Interpretação ( FB IV – 1988) TESTE DE ESTERILIDADE Interpretação ( FB IV – 1988) - Turvação do meio de cultura : presença de microrganismos viáveis - Não turvação do meio : ausência de microrganismos viáveis Presença de microrganismos no teste (contaminante) Identificação do contaminante Realização do primeiro reteste Presença de contaminante no primeiro reteste Ausência de contaminante – APROVADO Presença: Identificar o contaminante ( se for igual ao do teste original : Reprovado ; Se for diferente, realizar segundo reteste). Presença de contaminante no segundo reteste (dobro da quantidade da amostragem original): Reprovado; Ausência – Aprovado.