UPC II – Microbiologia Aula prática 4 2013/20134 Maria José Correia 7/10/2013

UPC II - Microbiologia 2013/2014 Sumário P4: Observação de bactérias do biofilme oral Preparação de esfregaço Técnicas de coloração: Colorações diferenciais (Coloração de Gram) 7/10/2013 UPC II - Microbiologia 2013/2014

UPC II - Microbiologia 2013/2014 Técnicas de coloração Permitem revelar a forma, a dimensão e os componentes das células bacterianas, bem como, os aspetos bioquímicos da sua estrutura. Permitem observar células bacterianas em microscopia de campo claro. Como o índice de refração do protoplasma bacteriano difere muito pouco do meio circundante, é difícil o exame direto de preparações não coradas, a não ser que se utilizem técnicas especiais de iluminação. 7/10/2013 UPC II - Microbiologia 2013/2014

UPC II - Microbiologia 2013/2014 Técnicas de coloração Preparação do esfregaço Fixação do esfregaço Coloração Observação ao microscópio 7/10/2013 UPC II - Microbiologia 2013/2014

UPC II - Microbiologia 2013/2014 Preparação e fixação do esfregaço Preparado sobre uma gota de água abrangendo uma superfície de 1 cm2 As lâminas usadas devem ser lavadas com uma mistura de álcool-éter (1:1) Fixação pelo calor em movimentos circulares. Evitar aquecer demasiado a preparação para não destruir as células 7/10/2013 UPC II - Microbiologia 2013/2014

NÃO APAGAR O FOGO COM ÁGUA Tapar o frasco e a lamparina Em caso de incêndio…. Manter a calma!!… os movimentos rápidos alimentam a combustão NÃO APAGAR O FOGO COM ÁGUA Tapar o frasco e a lamparina Cobertor Extintor 7/10/2013 UPC II - Microbiologia 2013/2014

UPC II - Microbiologia 2013/2014 Coloração de Gram Coloração diferencial Distingue bactérias Gram + de bactérias Gram- Indispensável na identificação bacteriana http://www.apsnet.org/education/IntroPlantPath/PathogenGroups/bacteria/text/fig12.htm Gram + Gram - 7/10/2013 UPC II - Microbiologia 2013/2014

UPC II - Microbiologia 2013/2014 Bactérias Gram+ e Gram- Composição diferente da parede celular Gram+: Parede homogénea e espessa, formada essencialmente por peptidoglucano, baixa percentagem de lipoproteínas. Gram-: Parede fina, camada de peptidoglucano fina, camada externa complexa, formada por lipoproteínas e polissacarídeos 7/10/2013 UPC II - Microbiologia 2013/2014

UPC II - Microbiologia 2013/2014 Coloração de Gram dH2O dH2O Violeta de cristal 1 minuto Lugol (iodo) 1 minuto Álcool 30-60 segundos Safranina 30-60 segundos 7/10/2013 UPC II - Microbiologia 2013/2014

Objetivo desta coloração Usar as colónias isoladas na aula anterior para fazer a coloração de Gram e distinguir se são Streptococcus. Só depois fazer a repicagem das colónias. 7/10/2013 UPC II - Microbiologia 2013/2014

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UPC II - Microbiologia 2013/2014 Trabalho a realizar: Observação das placas feitas na aula anterior. Registo das características das colónias. Isolamento de colónias (biofilme oral): Repicagem (riscado em placa). Usar uma placa nova e repicar uma colónia da placa anterior. Coloração de Gram das cplónias para escolher streptococcus. 7/10/2013 UPC II - Microbiologia 2013/2014