PLANTAS TRANSGÊNICAS: DE ONDE VEM, PARA AONDE VÃO? PARTE II PROF. MARCELO TEIXEIRA PACHECO UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL FACULDADE DE AGRONOMIA DEPARTAMENTO DE PLANTAS DE LAVOURA

TRANSFERÊNCIA DOS GENES CLONADOS PARA A PLANTA PRINCIPAIS MÉTODOS Transformação via Agrobacterium tumefaciens Biolística ou pistola de genes Eletroporação (descarga elétrica)

Agrobacterium tumefaciens TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens GALHA DA COROA Sintoma infecção por A. tumefaciens VETOR (veículo) DE TRANSFORMAÇÃO DE TRANSGENES Plasmídeo Ti A. tumefaciens

Agrobacterium tumefaciens TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens Agrobacterium tumefaciens A. tumefaciens Plasmídio Ti T-DNA DNA cromossômico Célula vegetal transformada Tumor da galha Cromossomo

Agrobacterium tumefaciens TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens Célula vegetal

PRINCIPAIS ETAPAS DA TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens Transferência para meio de cultura com antibiótico, herbicida ou outro método de seleção Co-cultivo de células da planta com Agrobacterium “desarmada” Testes da planta transgênica em laboratório e mais tarde a campo Regeneração da planta transgênica

Bombardeamento de partículas ou Biolística MICROPARTÍCULAS DE OURO GENE DE INTERESSE DNA ADERE ÀS PARTÍCULAS REGENERAÇÃO DAS PLANTAS TRANSGÊNICAS ACELERAÇÃO DAS PARTÍCULAS LIBERAÇÃO DO DNA NO NÚCLEO SELEÇÃO DAS CÉLULAS TRANSFORMADAS

TIPOS DE PISTOLAS DE GENES

CLICAR AQUI PARA VER ANIMAÇÃO PISTOLA DE GENES EM AÇÃO CLICAR AQUI PARA VER ANIMAÇÃO (após a animação recarregar a apresentação)

EXEMPLO DE TESTE A CAMPO Milho transgênico Bt (Resistente a diferentes insetos) Milho não transgênico

UM GENE SIMPLIFICADO CASSETE DO GENE Bt Promotor Seqüência de terminação Seqüência codificando gene Bt Controla quando, como e quanto o gene vai ser expresso Contém a informação do que o gene faz Diz onde termina o gene Gene de seleção Resistência a antibiótico, Resistência a herbicida, … Gene Bt CASSETE DO GENE Bt

NEM TUDO É TÃO SIMPLES GENES DEVEM SER “CONSTRUÍDOS” ANTES DE SEREM USADOS NA TRANSFORMAÇÃO DE PLANTAS PROMOTOR, GENE E SEQÜÊNCIA DE TERMINAÇÃO PODEM VIR DE ORGANISMOS DIFERENTES PORQUE A EFICIÊNCIA DE TRANSFERÊNCIA DO TRANSGENE É BAIXA (1 A 5%) É NECESSÁRIO USAR UM GENE MARCADOR PARA SELEÇÃO. (RESISTÊNCIA A ANTIBIÓTICOS E A HERBICIDAS MAIS COMUMENTES USADOS, MAS EXISTEM OUTRAS TÉCNICAS) NECESSÁRIOS VÁRIOS EVENTOS DE TRANSFORMAÇÃO PARA SELECIONAR UM TRANSGÊNICO COM AS CARACTERÍSTICAS DESEJADAS

EXEMPLOS DE DIFERENTES EVENTOS DE TRANSFORMAÇÃO BATATA RESISTENTE AO FUNGO Verticillium dahliae Não-transgênico Transgênico Transgênico Transgênico