Rio de Janeiro, 10 de Dezembro de 2010 Leandro Santiago Emmerick
INTRODUÇÃO Caranguejo da Lama Scylla serrata Taxonomia Característica do sudeste asiático Ampla importância econômica 108 mil toneladas em 2004 na China
INTRODUÇÃO MCRV Dicistrovírus - Família recente (2002) Retrovírus, positive- sense fita única (ssRNA), não envelopados 30nm de diâmetro e simetria icosaédrica
INTRODUÇÃO MCRV Infectam invertebrados Doença do sono 13 segmentos de RNA Necrose da gills e intestino dos hospedeiros infectados
INTRODUÇÃO VP3 121 aminoácidos Região C-terminal é carregada positivamente Sinal para localização e exportação nuclear Induz apoptose celular Muito imunogênica Antígeno produzido durante o processo de infecção e replicação viral
OBJETIVO Investigar os mecanismos da infecção por MCDV no caranguejo da lama Controlar a doença viral Estudar a estrutura da proteína VP3
E XPERIMENTOS Desenho de primers Expressão de MCDV-VP3 em E. coli Produção de 3 MAbs contra MCDV-VP3 Clonagem, expressão e purificação da recombinante Imunização de camundongos por injeção intraesplênica Caracterização dos MAbs por ELISA e Western Blotting Localização da MCDV-VP3 na superfície externa por MET
RESULTADOS Proteína recombinante purificada e principais proteínas estruturais do MCDV
1:2.048x10 5 Western blotting ELISA indireto 3 MAbs: 1G6H9 – 1E7B8 – 4B6E10 Os MAbs reconhecem a MCDV-VP3 RESULTADOS
VP3 é uma proteína do capsídeo do MCDV RESULTADOS
DISCUSSÃO MAbs: alta especificidade e atividade usadas para diagnóstico VP3 < VP1 e VP2 MAbs reconheceram tanto a nativa quanto a recombinante Os resultados sugerem que VP3 é uma nova proteína estrutural do MCDV
CONCLUSÃO Foi obtido e caracterizado com sucesso os MAbs contra MCDV que são altamente sensíveis e específicas tanto para a forma recombinante quanto para a forma nativa da proteína estrutural MCDV- VP3. Os MAbs fornecem uma ferramenta conveniente para uso em laboratório para estudar a biologia básica do MCDV e aprofundar o estudo do imunodiagnóstico da MCDV para controlar MCDV na aquicultura caranguejo da lama e reduzir a perda de produção de caranguejo associados MCDV.