Estudo do papel da proteína CIDEA no controle do estresse oxidativo celular Érika Carvalho Silva Disciplina: Termogênese nos seres vivos Professora: Ana Maria Landeira

Família Cide (Liang et al., 2003) (Cory, 1998)

Cidea e Cideb como indutoras de apoptose (Inohara et al., 1998)

Cide3 como indutora de apoptose 293T controle 293T CIDEB 293T CIDE3 (Liang et al., 2003)

Expressão das proteínas Cide em humanos (Inohara et al., 1998) (Liang et al., 2003)

Camundongos knockout

CIDEA e UCP1

AMPK e suas vias de sinalização

AMPK e Cidea

Cadeia Transportadora de Elétrons Modelo proposto Cidea MOM H+ H+ H+ H+ UCP F0 Cadeia Transportadora de Elétrons MIM ADP F1 H+ H+ ATP

Cadeia Transportadora de Elétrons Knockout MOM H+ H+ H+ H+ UCP F0 Cadeia Transportadora de Elétrons MIM ADP F1 H+ H+ ATP

Cadeia Transportadora de Elétrons Knockout MOM H+ H+ H+ H+ UCP F0 Cadeia Transportadora de Elétrons MIM ADP F1 H+ H+ ATP

Cadeia Transportadora de Elétrons Superexpressão Cidea Cidea Cidea MOM H+ H+ H+ H+ UCP F0 Cadeia Transportadora de Elétrons MIM ADP F1 H+ H+ ATP

Cadeia Transportadora de Elétrons Superexpressão Cidea Cidea Cidea MOM H+ H+ H+ H+ UCP F0 Cadeia Transportadora de Elétrons MIM ADP F1 X H+ H+ ATP

Cadeia Transportadora de Elétrons Superexpressão Cidea Cidea Cidea MOM H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ UCP F0 Cadeia Transportadora de Elétrons MIM ADP F1 X H+ H+ ATP

Cadeia Transportadora de Elétrons Superexpressão Cidea Cidea Cidea MOM H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ UCP F0 Cadeia Transportadora de Elétrons MIM ROS ADP F1 X H+ H+ ATP

Cadeia Transportadora de Elétrons Superexpressão Cidea Cidea Cidea MOM H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ UCP F0 Cadeia Transportadora de Elétrons MIM ROS ADP F1 X H+ H+ ATP Morte celular!!!

Objetivo Caracterizar o papel da proteína Cidea no controle do estresse oxidativo

1) Estabelecimento do modelo Linhagem Jurkat de célula T e células primárias Western blot para Cidea e UCP2

2) Colocalização e inibição de UCP2 por Cidea Microscopia confocal Imunoprecipitação de proteínas FACS para DiOC6

3) Efeito do estresse oxidativo: tratamento com H2O2 Célula Cidea-KO é mais resistente ao tratamento com peróxido de hidrogênio? Célula UCP2-KO produz mais espécies reativas de oxigênio? Após o tratamento com peróxido de hidrogênio, ocorre diminuição da interação entre Cidea e UCP2? Doses celulares letais de peróxido de hidrogênio associado a tratamento com FCCP em Cidea- KO inibe essa morte?

AMPK na proteção celular do estresse oxidativo

AMPK na proteção celular do estresse oxidativo

4) Papel de Cidea na regulação de AMPK e outras vias metabólicas Ocorre fosforilação de AMPK após tratamento com peróxido? Cidea é capaz de ubiquitinar AMPK e levá-la para a degradação? Não degradação de AMPK necessária para sobrevivência após tratamento com peróxido? O que ocorre com enzimas da via glicolítica?

5) Cidea como sensor redox? Modelagem molecular e localização das cisteínas. Mutagênese sítio-dirigida das cisteínas para avaliar capacidade de responder ao estresse oxidativo.

Aceito para The Journal of Biologial Chemistry

Outra proposta! Será um inibidor das proteínas CIDE um futuro medicamento anti-obesidade???