Amostras utilizadas em Imunoensaios Profa Amostras utilizadas em Imunoensaios Profa. Alessandra Pardini Disciplina: Imunologia Clínica

INTRODUÇÃO A validação dos imunoensaios é feita com base nos parâmetros de sensibilidade, especificidade, repetitividade, reprodutibilidade e estabilidade Problemas no imunoensaio = nova amostra = problema desaparece Os imunoensaios são objeto de padronização e normatização Controle de Qualidade – pré analítico

FATORES INERENTES AO PACIENTE: Idade Sexo Etnia Gravidez PREPARO E INSTRUÇÕES AO PACIENTE FATORES INERENTES AO PACIENTE: Idade Sexo Etnia Gravidez Período de Ciclo Menstrual Uso de medicamentos (anticoncepcional, vitaminas, etc)

JEJUM Não tem muita importância para Imunoensaios. No entanto, concentração excessiva de lipídios pode interferir em teste de imunoprecipitação e aglutinação. Evitar coletar amostras até 2h após refeição (almoço, janta) – pós- prandial. Recomendável jejum padrão de 8h se for realizar também outros exames. Jejum de 4h, se somente for realizar exames de imunoensaios. Beber água não invalida o jejum. Evitar álcool, fumo (afeta os hormônios)

GRAVIDEZ Geralmente ocorre resultados falso-positivos devido mudanças hormonais e protéicos como aumento de hCG, lactogênio, cortisol e hormônios tireoidianos. Perguntar a data da última menstruação e a semana gestacional, principalmente na determinação de hormônios.

EXERCÍCIO Exercícios com perda de água e suor alteram a concentração de parâmetros bioquímicos e hormônios. Fazer 30 minutos de repouso no laboratório antes da coleta.

IDADE Importante na determinação de hormônios, proteínas e substâncias do metabolismo bioquímico.

CICLO MENSTRUAL E RITMO CIRCADIANO Deve conter no laudo o dia do ciclo menstrual. Cortisol é o parâmetro mais afetado ao longo do dia. Preconiza-se coletar entre 7:00 e 9:00h da manhã.

Laboratório de Análises Clínicas Finalidades: Verificar estágios da condição biológica humana Verificar ausência de patologias, como parte de algoritmos médicos ex.: Diabetes Mellitus (adulto)‏ Estabelecer diagnósticos Fornecer informações para diagnóstico e acompanhamento de patologias agudas e crônicas

COLETA DE SANGUE O tipo de amostra para cada analito é definido por protocolos internacionais. Evitar hemoconcetração: não deixar o torniquete por mais de 1minuto. Evitar hemólise: ruptura de hemácias. Coleta em tubo seco ou gel, e anticoagulantes (citrato, heparina, EDTA e inibidor de glicose).

AMOSTRAS COLETA É o primeiro passo para TODAS as análises efetuadas no Laboratório Clínico Todas as etapas seguintes dependem da coleta do material - É importante que o procedimento apropriado (indicado) seja seguido = para obtenção de resultados exatos - Utilizar material completamente limpo para evitar falsos resultados

OBTENÇÃO DE SORO OU PLASMA É necessário certo tempo para formação do coágulo e retração ideal. Não é aconselhável refrigerar a amostra. Após centrifugação, obtêm o soro ou plasma.

OUTROS ESPÉCIMES BIOLÓGICOS USADOS NOS IMUNOENSAIOS URINA Determinação hormonal ou de drogas Líquido Cefalorraquidiano (LCR) Pesquisa de antígenos bacterianos, virais e parasitários Pesquisa de Ac LÍQUIDO AMNIÓTICO Amniocentese procedimento para obtenção de líquido após 16ª. Semana de gestação. Não deve conter sangue. Pesquisar presença de patógenos.

OUTROS ESPÉCIMES BIOLÓGICOS USADOS NOS IMUNOENSAIOS FEZES Pesquisar a presença de antígenos SALIVA Determinação de hormônios livres: cortisol, progesterona, estradiol e testosterona; e as drogas teofilina, digoxina e diazepam. SÉMEN Pesquisa de anticorpos antiespermatozóides. Manter 3 dias de abstinência sexual. Após ejaculação aguardar 30 min, e usar o material em até 2h

Agradecimento: Profa. Adriana Di Brito, pelo material gentilmente cedido Bibliografia: VAZ et al., Imunoensaios – Fundamentos e Aplicações, Guanabara Koogan, 2007. Internet: Pesquisa na internet agosto de 2011 Cruz, CF, LACEN/PR