Laboratório de Práticas Integradas Profa. MSc. Mariana de Oliveira Mauro.

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1 Laboratório de Práticas Integradas Profa. MSc. Mariana de Oliveira Mauro

2 Eritropoiese A célula progenitora mielóide se diferencia em mais dois tipos que são a UFC eritróide- megacariocítica e a UFC granulocítica- monocítica

3 Eritropoiese O precursor eritróide- megacariocítico se diferencia no eritroblasto, que sofrerá maturação e se transformará, em última instância, numa hemácia (eritrócito). O núcleo maduro torna-se gradativamente picnótico e à medida que a célula amadurece, até ser finalmente expulso antes da célula sair da medula como reticulócito

4 Eritropoiese O ferro é essencial para a eritropoiese, principalmente para a síntese de hemoglobina pelos eritroblastos em maturação. Nos eritroblastos, o ferro é principalmente utilizado pela mitocôndria para a síntese do heme.

5 Reticulócitos Método : coloração supravital (azul de cresil brilhante). Princípio: consiste na coloração das células após a morte somática e antes da ocorrência da morte molecular, isto é, depois de removidos do organismo vivo, mas antes de cessarem todas as atividades celulares.

6 Reticulócitos Interpretação Clínica O número dos reticulócitos na circulação periférica constitui índices do grau de regeneração dos eritrócitos na medula óssea. Seu aumento (reticulocitose) indica hiperatividade da medula. A diminuição (reticulocitopenia) revela hipoatividade. Encontra-se também aumentando durante a gravidez.

7 Eritropoiese A hemoglobina é um tetrâmero composto de dois tipos de cadeias de globina, a alfa e a beta. Cada uma dessas cadeias contém cerca de 141 aminoácidos. Existem quatro grupos heme por proteína; estes possuem um íon de ferro no seu centro, que liga a molécula de O2. É uma proteína alostérica, pois a ligação e a liberação do oxigênio é regulada por mudanças na estrutura provocadas pela própria ligação do oxigênio ao grupo heme.

8 Hemoglobina Existe três tipos de hemoglobina, devido a variação na cadeia polipeptidica: Hemoglobina A1, Hemoglobina A2, Hemoglobinas F,C,S. A hemoglobina padrão é chamada de hemoglobina A, aquelas hemoglobinas que não são A são as chamadas de variantes.

9 Hemoglobina HEMOGLOBINA C (HbC). A HbC, oriunda da África ocidental, é a 2ª hemoglobina anormal mais frequente no Brasil. Sua prevalência média é 0,6 % na população em estado de heterozigose, seja HbAC. Os portadores heterozigóticos HbAC são assintomáticos, não têm anemia e não apresentam aumento de destruição de eritrócitos. No esfregaço sanguíneo podem aparecer numerosas células em alvo. Os portadores homozigóticos HbCC apresentam anemia hemolítica crônica moderada, esplenomegalia, icterícia e sintomas clínicos como cansaço, fraqueza e desconforto abdominal.

10 Hemoglobina HEMOGLOBINAS INSTÁVEIS (HbH). As hemoglobinas instáveis constituem um grupo de aproximadamente 150 tipos de hemoglobinas anormais responsáveis por anemias hemolíticas, agudas ou crônicas. Podem ser identificadas pela tendência de se precipitarem quando submetidas à desnaturação pelo calor (50 a 60ºC). Em pacientes esplenectomizados, com hemoglobinas instáveis, observam-se corpúsculos de Heinz nas hemácias do sangue periférico. Fisiologicamente, a instabilização da hemoglobina decorre de uma ligação anormal entre as cadeias alfa e beta ou na região interna da molécula que constitui o "pacote" do grupo heme, provocando a desestabilização entre as globinas alfa e beta, e afrouxamento do grupo heme. As globinas desestabilizadas se precipitam e formam os corpúsculos de Heinz. Estes, por sua vez, se fixam na membrana das hemácias por duplas ligações de enxofre, alterando-lhe a permeabilidade e a osmose, provocando, consequentemente, a sua destruição precoce e anemia.

11 Eletroforese de Hemoglobina Material Biológico: Sangue total com EDTA ou com heparina. Coleta: Volume mínimo 3 ml de sangue total com EDTA ou heparina. Armazenamento: Refrigerar a amostra a +4ºC. Nesta temperatura o sangue heparinizado se conserva durante 1 semana e o com EDTA durante até 3 semanas. Preparo do Paciente: Jejum de 4 ou mais horas. Água ad libitum. Método: HPLC ou fracionamento eletroforético sobre acetato de celulose.

12 Eletroforese de Hemoglobina

13 INTERPRETAÇÃO Quando no resultado estiver escrito apenas um A, por ex. AS ou AC ele deve ser considerado com o um resultado indicativo de uma característica ou padrão familiar ou seja, o exame detectou TRAÇO FALCIFORME ou HETEROZIGOTO para hemoglobina S ou C (HbAS ou HbAC). Quando no resultado não existir nenhum A, o teste deve ser considerado ALTERADO ou HOMOZIGOTO para hemoglobina S ou C (Hb SS, Hb SC ou H b ou CC).

14 Resultados Possíveis RESULTADOS POSSÍVEIS: 1.Hb AA -­ ‐ padrão ou normal. Pessoa sem doença falciforme. 2.Hb AS -­ ‐ heterozigoze para hemoglobina S ou traço falciforme: Pessoa sem doença falciforme; 3.Hb AC -­ ‐ heterozigoze para hemoglobina C: Pessoa sem doença falciforme;

15 Resultados Possíveis 4. Hb A com variante qualquer: Pessoa sem doença falciforme; 5.Hb SS ou SC: pessoa com doença falciforme ou ainda Hb S + outra variante, ou Hb C + outra variante (com doença falciforme)

16 Ferrograma Origem do Ferro: No organismo, tem dupla origem: o ferro exógeno, ingerido com os alimentos, o e ferro endógeno, proveniente da destruição das hemácias, que libera cerca de 27 mg do metal, em seguida reutilizado. A distribuição do ferro corporal é feita entre compartimentos: o Funcional - hemoglobina, mioglobina, enzimas heme e não-heme. o Transporte - transferrina o Reserva - Ferritina e hemossiderina.

17 Exame: Ferro Sérico 1. Diagnóstico diferencial de anemias 2. Diagnóstico de hemocromatose e hemossiderose 3. Deve ser medido com CTLF para avaliação da deficiência de ferro 4. Diagnóstico da toxicidade férrica aguda Valor de referência: o Masculino: 53 –167ug/dL o Feminino: 49-151ug/dL

18 Exame: Ferro Sérico Aumentado em: Hemocromatose idiopática; Hemossiderose por ingesta excessiva de ferro(p. ex., transfusões repetidas de sangue, terapia com ferro, vitaminas que contêm ferro) Produção diminuída de hemácias (p. ex., talassemia, anemia por deficiência de piridoxina, anemia perniciosa em recuperação) Aumento na destruição de hemácias (p. ex., anemias hemolíticas) Dano hepático agudo (grau de elevação é paralelo ao tamanho da necrose hepática); alguns casos de hepatopatia crônica

19 Exame: Ferro Sérico Diminuído em: o Anemia ferropriva o Anemias normocrômicas (normo ou microcítica) de infecção e doenças crônicas (p. ex., neoplasias, doenças do colágeno em atividade); o Nefrose (devido à perda de proteína ligada ao ferro na urina) o Anemia perniciosa no início da remissão o Menstruação (diminuição de 10-30%)

20 Exame: Transferrina Sérica Uso: Diagnóstico diferencial de anemias Valor de ref: o Masc.: 230-430mg/dL o Fem.: 250-380mg/dL o Criança: 203-360mg/dL Aumentada em: Anemia por deficiência de ferro; Gestação, terapia com estrogênios, hiperestrogenismo

21 Exame: Transferrina Sérica Diminuída em: o Anemia microcítica hipocrômica da doença crônica o Inflamação aguda; o Deficiência ou perda de proteínas; o Queimaduras; o Infecções crônicas o Doenças crônicas (p. ex., diferentes doenças do fígado e dos rins, neoplasias) o Nefrose o Má nutrição o Deficiência genética

22 Capacidade de Ligação Total do Ferro Uso Diagnóstico diferencial de anemia. Um aumento na concentração plasmática de transferrina aumenta a CLTF. Pode ser utilizado sempre que o ferro sérico for medido para calcular o percentual de saturação para o diagnóstico de deficiência de ferro Valor de ref: 250-410ug/dL Aumentada em: o Deficiência de ferro o Perda sangüínea aguda e crônica o Lesão hepática aguda o Gestação tardia o Pílulas anticoncepcionais à base de progesterona

23 Capacidade de Ligação Total do Ferro Diminuída em: o Hemocromatose o Cirrose o Talassemia o Anemias de infecção e doenças crônicas o Nefrose o Hipertireoidismo

24 Ferritina A ferritina é uma proteína globular que se localiza essencialmente no fígado. Proteína de reserva do ferro. Função primária: acumular ferro intracelularmente protegendo as células dos efeitos tóxicos do metal livre. 1 g de ferritina estoca até 8g de ferro. VR: o Masc. 30-323 mg/m o Fem. 12-150 mg/m o Até 15 anos: 10- 150 mg/mL

25 Ferritina Elevada em: o Infecções, traumatismos e inflamações agudas. o Excesso de ferro, pacientes transfundidos e em algumas neoplasias o Anemias hemolíticas; o Lesões hepáticas; Diminuída em: o Carência de ferro por perda excessiva de sangue; o Carência de ferro por má absorção; o Exame diferencial entre anemia ferropriva e anemias por outras causas.