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Sequenciação de DNA Método de Sanger Universidade Católica Portuguesa – Polo de Viseu Genética molecular Docente: prof. Maria José Correia Trabalho elaborado.

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1 Sequenciação de DNA Método de Sanger Universidade Católica Portuguesa – Polo de Viseu Genética molecular Docente: prof. Maria José Correia Trabalho elaborado por: Sofia Gomes Nº Turma: LCB

2 Em que consiste? Síntese enzimática de uma fita complementar, cujo crescimento é interrompido pela adição de um dideoxinucleotídeo

3 Utiliza-se o método se Sanger quando se quer determinar a sequência exata de uma cadeia de DNA até 500 nucleótidos Este método envolve uma nova síntese de DNA, usando como molde a cadeia de DNA que se quer sequenciar A síntese acaba com a incorporação de nucleótidos terminadores que são derivados de ddNTPs que não possuem um grupo hidroxilo na posição 3 da desoxiribose Os nucleótidos terminadores são designados: ddA, ddC, ddG e ddT

4 Passos do método: Separação das cadeias de DNA Utilização de primers Utilização da DNA polimerase Marcação radioativa do DNA Reação dividida em 4 etapas, correspondendo aos 4 nucleótidos possíveis no DNA

5 FIG.1 - Clones de DNA podem ser sequenciados pelo método de Sanger, usando ddNTPs marcados com fluorescência

6 Fig. 2 - Método de Sanger.

7 Aplicações Sequenciamento de genomas e automação


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