Sequenciação de DNA Método de Sanger

Apresentação em tema: "Sequenciação de DNA Método de Sanger"— Transcrição da apresentação:

1 Sequenciação de DNA Método de Sanger
Universidade Católica Portuguesa – Polo de Viseu Genética molecular Docente: prof. Maria José Correia Sequenciação de DNA Método de Sanger Trabalho elaborado por: Sofia Gomes Nº Turma: LCB

2 Em que consiste? Síntese enzimática de uma fita complementar, cujo crescimento é interrompido pela adição de um dideoxinucleotídeo

3 Utiliza-se o método se Sanger quando se quer determinar a sequência exata de uma cadeia de DNA até 500 nucleótidos Este método envolve uma nova síntese de DNA, usando como molde a cadeia de DNA que se quer sequenciar A síntese acaba com a incorporação de nucleótidos terminadores que são derivados de ddNTPs que não possuem um grupo hidroxilo na posição 3’ da desoxiribose Os nucleótidos terminadores são designados: ddA, ddC, ddG e ddT

4 Passos do método: Separação das cadeias de DNA Utilização de primers
Utilização da DNA polimerase Marcação radioativa do DNA Reação dividida em 4 etapas, correspondendo aos 4 nucleótidos possíveis no DNA

5 FIG.1 - Clones de DNA podem ser sequenciados pelo método de Sanger, usando ddNTPs marcados com fluorescência

6 Fig. 2 - Método de Sanger.

7 Aplicações Sequenciamento de genomas e automação