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PCR Polymerase Chain Reaction Amplificação in vitro de uma seqüência específica de DNA * replicação in vitro.

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Apresentação em tema: "PCR Polymerase Chain Reaction Amplificação in vitro de uma seqüência específica de DNA * replicação in vitro."— Transcrição da apresentação:

1 PCR Polymerase Chain Reaction Amplificação in vitro de uma seqüência específica de DNA * replicação in vitro

2 História Kary Mullis (1983) Prêmio Nobel Química (1993) Revolucionou genética pesquisa genética medicina forense genética molecular

3 Componentes da reação DNA molde Oligonucleotídeos (primer) dNTPs DNA Polimerase Magnésio Tampão Água

4 Thermus aquaticus -Estável a temperaturas de 177 graus; Temperatura Ótima: 72 graus

5 Thomas D. Brock no lago do Yellowstone National Park de onde foi isolado o Thermus aquaticus

6 Equipamento TERMOCICLADOR

7 PCR PCR se constitui hoje no método de rotina para isolar rapidamente sequências específicas a partir de uma mistura complexa de seqüências genômicas ou de cDNAs.

8 Programa 94 0 C por 5 min 94 0 C por 1 min 55 0 C por 1 min 72 0 C por 1 min 72 0 C por 5 min 4 0 C 35 ciclos PCR CICLOS

9 O ciclo da PCR

10 ETAPAS -Extração de DNA -Desenho dos Primers -Reação de PCR - Análise dos resultados

11 EXTRAÇÃO DO DNA

12 DELINEAMENTO DE PRIMERS Os iniciadores (oligos / primers) são a chave do sucesso ou da falha de um experimento com PCR. -Tamanho dos primers; - Estabelecimento das temperaturas corretas a serem utilizadas;

13 ETAPAS DA PCR

14 DESNATURAÇÃO ANELAMENTO POLIMERIZAÇÃO ETAPAS DA PCR

15

16

17 Eletroforese

18 Eletroforese em gel de agarose

19 Visualização do DNA em luz ultravioleta

20 ANIMAÇÃO


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