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Características do DNA Formado por fita dupla complementar; 5´3´ 5´

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Apresentação em tema: "Características do DNA Formado por fita dupla complementar; 5´3´ 5´"— Transcrição da apresentação:

1 Características do DNA Formado por fita dupla complementar; 5´3´ 5´

2 Características do DNA Capacidade de autoreduplicação; Formado por bases nitrogenadas (A, C, G e T);

3 Introdução ao PCR Reação da Polimerase em Cadeia Outubro de 1985 (idéia em 1983) Publicado na American Society of Human Genetics criado por Kary B. Mullis

4 Características do PCR Amplificação de Seqüências de DNA ou RNA Processo Cíclico –15 a 40 ciclos –realizado por mudança de temperatura

5 Produção de DNA por PCR Produção de 2 a 4 g DNA em 1-3 hs específico = amplifica sequência-alvo na presença de DNA genômico sensível = detecta inclusive 1 sequência de molde (DNA ou RNA) flexível = muitas variações da técnica básica de PCR

6 Requerimentos Básicos do PCR 1. Molde - DNA ou RNA 2. DNA polimerase 3. dNTPs 4. Iniciadores de Oligonucleotídeos (Primers)

7 Função dos Iniciadores Primers fornecer grupo 3 OH para iniciar a síntese de DNA definir os limites do segmento de DNA-alvo a ser amplificado estabelecer especificidade

8

9 Oligos Iniciadores Primers sintetizados quimicamente tipicamente entre 15 a 25 bases define limites de alvo a amplificar –prévio conhecimento da sequência alvo –primer de seqüências aleatórias

10 Ciclos de Temperatura no PCR Anelamento do Primer Tm Desnaturação Extensão 94 o C do Primer 72 o C

11 Desnaturação do DNA 94 a 100 o C desnaturar inicialmente o DNA alvo desnaturar produtos de ciclos prévios duração de 30 s a 1 min

12 Anelamento do Primer 40 a 70 o C temperatura de hibridização otimização da temperatura para cada par de primer –composição = %G+C –determina especificidade do produto amplificado tipicamente 30 s a 2 min

13 Extensão do Primer 72 o C Taq polimerase –faixa de atividade: 20 o C a 85 o C –atividade varia 100x nessa faixa Tempo de extensão varia de acordo com tamanho do produto desejado

14 Exponencialidade do PCR Caso ideal: N = N o 2 n N = número de moléculas amplificadas N o = número inicial de moléculas n = número de ciclos de amplificação

15 Amplificação Geométrica CicloNúmero Fita Duplas produzidas


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