A apresentação está carregando. Por favor, espere

A apresentação está carregando. Por favor, espere

Graduação em Biotecnologia Disciplina de Técnicas Instrumentais Prof. Fabricio Rochedo Conceição 11.

Apresentações semelhantes


Apresentação em tema: "Graduação em Biotecnologia Disciplina de Técnicas Instrumentais Prof. Fabricio Rochedo Conceição 11."— Transcrição da apresentação:

1 Graduação em Biotecnologia Disciplina de Técnicas Instrumentais Prof. Fabricio Rochedo Conceição 11 de maio de 2012 Espectrofotometria

2 Espectrofotometria visível e ultravioleta Método analítico baseado em medidas de absorção de radiação eletromagnética Permite identificar e quantificar compostos orgânicos e inorgânicos Região ultravioleta – 200 a 400 nm Região visível – 400 a 800 nm

3 Aplicações Esta técnica é muito usada em laboratórios de controle de qualidade (indústrias), pesquisa e de análises clínicas e toxicológicas Em biotecnologia: - Proteômica - Genômica - Transgenia - Expressão de proteínas recombinantes... *** Análise de proteínas, DNA e RNA

4

5 Absorção de Radiação Vários fenômenos podem ocorrer com a radiação luminosa, como: reflexão, refração, espalhamento ou absorção

6 Absorção de Radiação Os comprimentos de onda que uma certa substância absorverá são característicos da sua estrutura, diferindo de substância para substância. Exemplos: – DNA e RNA = 260 nm – Proteínas = 280 nm – Células bacterianas = 600 nm – Benzeno = 255 nm...

7 Lei de Lambert-Beer Através dessa lei, intensidades da radiação incidente e emergente podem ser relacionadas com as concentrações do material presente na solução – Efeitos de reflexão, refração e espalhamento não são considerados nessa lei. – A radiação incidente deve ser monocromática

8 Lei de Lambert-Beer I 0 = intensidade da luz incidente I 1 = é a intensidade da luz uma vez tendo atravessado o meio l = é a distância que a luz atravessa A = - log 10 T T = I 1 / I 0

9 Transmitância É a intensidade de luz remanescente após passar por uma amostra de matéria. 0 a 100% Absorbância É a capacidade do material em absorver radiações de comprimento de onda específico. 0 a 2

10 ENFIM, a lei de Lambert-Beer permite determinar a concentração de uma substância em função da absorção de luz

11 Espectrofotômetro É um instrumento que serve para medir a intensidade da luz em função de um comprimento de onda específico.

12 Diagrama de um espectrofotômetro

13 Fontes luminosas mais comuns Luz UV – Lâmpada de gás hidrogênio ou deutério – Mercúrio Luz Visível – Tungstênio

14 Cubetas Espectrofotometria de Luz Visível – Cubeta de Vidro ou Plástico Espectrofotometria de Luz Ultravioleta – Cubeta de Quartzo

15 Dicas Localização do espectrofotômetro - Bancada estável e exclusiva (se possível) - Longe de fontes eletromagnéticas (rádio, microondas...) Ligar 30 mim antes do uso Cubetas (tipo e manuseio) Calibração

16 Obrigado!


Carregar ppt "Graduação em Biotecnologia Disciplina de Técnicas Instrumentais Prof. Fabricio Rochedo Conceição 11."

Apresentações semelhantes


Anúncios Google