TÉCNICAS CITOQUÍMICAS UTILIZADAS NO ESTUDO DAS GLÂNDULAS ACESSÓRIAS MASCULINAS DE CHIROPTERA (MAMMALIA) Disciplina: Microscopia e Microanálise Docente:

Apresentação em tema: "TÉCNICAS CITOQUÍMICAS UTILIZADAS NO ESTUDO DAS GLÂNDULAS ACESSÓRIAS MASCULINAS DE CHIROPTERA (MAMMALIA) Disciplina: Microscopia e Microanálise Docente:"— Transcrição da apresentação:

1 TÉCNICAS CITOQUÍMICAS UTILIZADAS NO ESTUDO DAS GLÂNDULAS ACESSÓRIAS MASCULINAS DE CHIROPTERA (MAMMALIA) Disciplina: Microscopia e Microanálise Docente: Profa. Dra. Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira Discente: Cíntia Cristina Isicawa Puga

2 Sumário Projeto de Pesquisa Técnicas Citoquímicas
Resultados Preliminares

3 Projeto de Pesquisa Morfofisiologia da Próstata de Morcegos: Estudos nas espécies Artibeus planirostris e Platyrrhinus lineatus (Phyllostomidae: Chiroptera) Cíntia Cristina Isicawa Puga Prof. Dr. Sebastião Roberto Taboga (Orientador) – IBILCE/UNESP Profa. Dra. Patricia Simone Leite Vilamaior (Co-orientadora) - UNIRP

4 INTRODUÇÃO Ordem Chiroptera  2ª maior dos Mammalia
200 gêneros e 1000 espécies; Regiões tropicais e temperadas, com exceção de algumas ilhas oceânicas remotas e a Antártica (REIS et al., 2006) Ampla radiação + avanços nos estudos com enfoques evolutivos Aspectos relativos à biologia reprodutiva  pouco explorados glândulas acessórias do sistema genital e às relações funcionais dessas glândulas com as variações sazonais

5 Morcegos hibernantes de zonas temperadas  reprodutores sazonais
Ampla distribuição geográfica  influência de fatores abióticos  estratégias reprodutivas Detectadas através de comportamento ou da avaliação funcional das gônadas e das glândulas anexas (SWAMI & LALL ,1982) Morcegos hibernantes de zonas temperadas  reprodutores sazonais Zonas tropicais  padrão reprodutivo complexo  Influências Variações da temperatura, Pluviosidade, Disponibilidade de recursos alimentares -FLEMING et al., 1972; -TADDEI, 1976.

6 Objetivo Avaliar as glândulas sexuais acessórias masculinas, com ênfase à próstata de morcegos representantes da família Phyllostomidae (Artibeus planirostris e Platyrrhinus lineatus).

7 Artibeus planirostris Platyrrhinus lineatus
Artibeus planirostris Platyrrhinus lineatus

8 Método de Coleta Redes de Neblina Coletas seriadas

9 Microscopia de luz Hematoxilina-Eosina: estrutura glandular, quantificações celulares, reconstrução tridimensional e densidade de volume dos componentes prostáticos (avaliação estereológica); Método do P.A.S: atividade secretora geral da glândula; Método da Reticulina de Gömöri: elementos do estroma glandular. Análise Imunocitoquímica para Receptor Androgênico (AR): expressão de receptores androgênicos (AR) durante os meses do ano. Fosfatase ácida: Para a detecção da atividade de fosfatase ácida prostática

10 Microscopia Eletrônica de Transmissão e de Varredura
Dosagens hormonais: punção endocárdica Testosterona

11 Fixação Retirada do material Inclusão em Resina/Parafina Secções no Micrótomo

12 Técnicas citoquímicas
Hematoxilina & Eosina Hematoxilina (basófila) → substratos básicos → fosfato do DNA e RNA → núcleo e o Retículo Endoplasmático Rugoso, locais onde há grande quantidade de proteínas (básicas pelo seu grupamento amina) Eosina (acidófila) → cora citoplasma tonalidade rósea, atua sobre citoplasma, fibras colágenas e outras substâncias ácidas das células.

13 ÁGUA ÁGUA ÁL 80% 5’ 8’ 10’ 1’ ABS III 1’ 5’ 1’ 1’ 1’ 1’

14 5.0 µm

15

16 REAÇÃO DO PAS (ÁCIDO PERIÓDICO/REATIVO DE SCHIFF)
Um pré tratamento determina a especificidade da coloração quando se utiliza o Reativo de Schiff Reação de Feulgen → hidrolise acida com HCl Reação do PAS → oxidação com o ácido periódico Reação do PAS Secreção Epitélio

17 Etapas 1. Oxidação do material com ácido periódico produção de radicais aldeídos nas moléculas de carboidrato 2. Estes radicais aldeído vão se ligar ao leucoderivado da Fucsina básica restaurando o grupo cromoforico e produzindo um composto corado

18 Metabissulfito de Sódio
ÁGUA ÁGUA 5’ 8’ 40’ 60’ 3x 5’ ÁGUA ÁGUA ABS III 2’ 1’ 1’ 1’ 1’ 10’ 10’ 1’

19

20 Obrigada!