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PublicouVinícius Manuel Prado Miranda Alterado mais de 8 anos atrás
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Faculdade de Biomedicina Disciplina de Instrumentação Laboratorial
Espectrofotômetro Faculdade de Biomedicina Disciplina de Instrumentação Laboratorial
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Exemplo de laudo de glicemia:
Glicemia valor de referência 190 mg/dL a 99 mg/dL
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Onda de luz
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T = transmitância Po = quantidade de luz monocromática incidente
A = Absorbância P = quantidade de luz monocromática transmitida
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Lei de Lambert-Beer
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Componentes do Espectrofotômetro
Fonte de luz estável Filtro que permite a passagem de um comprimento de onda específico Cubeta de leitura da amostra Fotodetector Processador Tela de leitura das medidas
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Componentes
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Fonte de luz Tungstênio: fornece luz no espectro visível
Deutério: fornece luz na faixa de UV. Xenônio: forncece luz no espectro visível e UV.
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Filtros Pré-amostra O filtro está posicionado entre a fonte de luz a e amostra. Pós-amostra O filtro ou prisma está posicionado entre a amostra e o fotodetector.
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Prisma
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Devem ser muito bem limpas e secas após o uso.
Cubetas de leitura Devem ser de material transparente para os comprimentos de onda utilizados. Para o espectro UV (que lê comprimentos de onda < 350 nm) as cubetas devem ser feitas de sílica ou quartzo. Para os comprimentos de ondas visíveis pode ser de material plástico ou vidro. Normalmente tem 1 cm de largura (path length). Devem ser muito bem limpas e secas após o uso.
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Cubetas para leitura Cubetas
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Fotodetector Fotomultiplicador
Fótons da onda eletromagnética do comprimento de onda estudado excitam os elétrons da última camada dos metais presentes no fotomultiplicador, criando uma corrente elétrica que pode ser amplificada e quantificada.
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Fotomultiplicador
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Espetrofotômetro
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Espectrofotômetro
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Espectrofotômetro cobas modular (Roche)
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GeneQuant para amostras de DNA e RNA
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Espectrofotômetro Nanodrop para amostras de DNA e RNA
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Gráfico de uma análise espectrofotométrica de DNA
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Quantificação de DNA ou RNA
Por definição, uma unidade de absorbância a 260 nm equivale a uma concentração de 50 ug de DNA por mL. Para RNA uma unidade de absorbância em 260nm equivale a uma concentração de 40 ug/mL
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