Selecção de transconjugantes

Apresentação em tema: "Selecção de transconjugantes"— Transcrição da apresentação:

1 Selecção de transconjugantes
Microbiologia Selecção de transconjugantes

2 Objectivos Identificação das bactérias a utilizar
Selecção dos transconjugantes

3 Identificação das bactérias receptora e dadora a utilizar
avaliação da capacidade que um microrganismo tem de proliferar/crescer in vitro e na presença de vários fármacos. Método de Difusão (de Kirby-Bauer [1] ) [1] - Agar Mueller-Hinton é um meio de cultura que é frequentemente usado para testes de susceptibilidade antimicrobiana. 30,0% Infusão de carne; 1,75% Caseína hidrolisada; 0,15% Amido; 1,7% Agar; pH ajustado para 7,00 a 25 °C

4 Epsilon Test

5

6 A partir dos testes de susceptibilidade foi possível concluir que as bactérias a utilizar na conjugação seriam a 999 e a K802N, respectivamente espécie dadora e espécie receptora. Estirpe 999 – fermentadora da lactose resistente à amoxicilina (não formou halo de inibição) A estirpe K802 N – não fermentadora da lactose resistente ao ácido nalidixico (não formou halo de inibição).

7 Uma bactéria receptora é a que possui o DNA cromossómico que recebe o plasmídeo da dadora. O conhecimento das características das estirpes é fundamental para que estas possam ser correctamente escolhidas no laboratório para ensaios de conjugação.

8 Encontro entre a espécie dadora e a receptora
Estirpe 999 (fermentadora da lactose e resistente à amoxicilina) (100µL) K802N (não fermentadora da lactose e resistente ao ácido nalidíxico) (100µL)

9 Selecção de transconjugantes
Transconjugantes - transconjugação entre bactérias receptora e dadora. Têm as características cromossómicas conferidas pela bactéria receptora, mas com DNA plasmídico da dadora, que confere resistência à amoxicilina. Os transconjugantes são, assim: Não fermentadores da lactose (Lac -) Resistentes aos dois antibióticos (amoxicilina e ácido nalídixico)

10 A conjugação conduz ao aparecimento de uma mistura das 3 populações bacterianas: bactérias dadoras, receptoras e transconjugantes; Verifica-se a presença das bactérias transconjugantes, inoculando-as em meio sólido com os 2 antibióticos; Realiza-se o plaqueamento num meio selectivo, contendo os 2 antibióticos aos quais queremos testar a resistência; O meio de MacConkey é um meio de selecção que promove o crescimento dos transconjugantes, pois neste caso apresenta amoxicilina e ácido nalidíxico.

11 Placa de controlo O meio de seleção tem de ser controlado quanto à sua eficácia, por isso é utilizado um lote de placas em que uma delas é de controlo/testemunho, placa esta sem antibiótico. O objectivo é verificar se o lote utilizado pode realmente ser usado para a selecção em causa.