Coloração de Gram A técnica consiste basicamente nas seguintes etapas: Preparar uma lâmina de vidro com uma fina camada de bactérias fixa (esfregaço); Cobrir o esfregaço com cristal violeta por 1 minuto. Enxaguar em água corrente; Cobrir com lugol por 1 minuto. Enxaguar em água corrente; Descorar com solução de álcool-acetona por 30 segundos. Enxaguar em água corrente; Contra-corar com safranina (ou fucsina) por 30 segundos. Enxaguar em água corrente. Deixar secar ao ar. 1884- Christian Gram = rápida, baixo custo de diagnóstico do tipo de parede celular da bactéria em estudo
A coloração de Gram se baseia em algumas diferenças estruturais existentes entre a parede celular de uma bactéria Gram negativa e de uma Gram positiva. A principal delas é que a parede celular de uma bactéria Gram positiva, embora mais espessa, é quimicamente mais simples, ou seja, apresenta predominantemente um único tipo de macromolécula (90% peptidioglicano). Já a parede celular de uma bactéria Gram negativa é mais complexa. É formada por uma ou poucas camadas de peptidioglicano e por uma membrana externa, separadas entre si por um espaço periplásmico, contendo uma série de enzimas e proteínas. Enquanto nas Gram positivas o peptidioglicano representa de 15 a 50% da massa seca da célula, nas Gram negativas ele representa no máximo 5%.