Outros Sistemas de Importância Clínica Sistemas Kell, Duffy, Kidd, MNS Lilian Castilho, PhD Simpósio Hemopasso Passo Fundo, 24 a 26/03/2008

Sistema Kell Grande importância na medicina transfusional, depois dos sistemas ABO e Rh, pois os antígenos são potentes imunógenos Anticorpos do sistema Kell Reação transfusional hemolítica Doença hemolítica do recém-nascido (DHRN)

Sistema Kell 1946: Coombs et al ISBT: 006 Altamente polimórfico 31 antígenos Principais antígenos: K, k, Kpa, Kpb, Jsa, Jsb (antitéticos) Fenótipo null: K0 Expressos somente nos eritrócitos

Sistema Kell Localização cromossômica: 7q33 Gene:KEL Produto gênico:glicoproteína (732 aa) Proteína Kell interage na membrana da hemácia com a proteína Kx e tem função enzimática Polimorfismo associado com mutações de ponto (SNPs)

Sistema Kell Localização dos resíduos de aa responsáveis pelo polimorfismo Kell

Sistemas Kell e Kx Forte associação entre as glicoproteínas Kell e Kx na membrana da hemácia Ausência ou redução da glicoproteína Kell resulta na elevação de Kx Fenótipo McLeod: perda de Kx  enfraquecimento da expressão dos antígenos Kell

Antígenos Kell Expressão alterada dos antígenos Fenótipo McLeod :Kx Kell Fenótipo Kmod: Kell Kx Fenótipo Kp(a+b-)

Fenótipo Knull ou K0 Gene Ko  alelo silencioso no locus Kell Fenótipo Kell null  Ko Ko  Kx em abundância Hemácias Ko tem sobrevida normal Indivíduos Ko alomunizados  anti-Ku : RTH e DHRN Fenótipo raro: porém com maior frequência Finlândia e Japão

Sistema Kell Antígenos Kell são resistentes ao tratamento pelas enzimas mas são sensíveis ao tratamento com DTT

Sistema Kell Alo-anticorpos anti-K IgG, raramente IgM reativos a 37oC e AGH clinicamente significantes Auto-anticorpos anti-Ku

Sistema Kell DHPN: anti-K título de anti-K e níveis de bilirrubina no líquido amniótico não se correlacionam com a severidade da doença genotipagem do feto tem um valor clínico importante

Sistema Kell Fenotipagem Genotipagem

Sistema Duffy 1950: Cutbush et al ISBT: 008 6 antígenos: Fya, Fyb, Fy3, Fy4, Fy5, Fy6 Fenótipo null: Fy(a-b-) em Caucasianos Expressão alterada no fenótipo Fyx Expressos nas hemácias e vários tecidos

Sistema Duffy Localização cromossômica: 1q22-q23 Gene: FY Produto gênico: glicoproteína (336/338 aa) Proteína Duffy: receptor P. vivax e P. knowlesi e quimioquinas (IL-8, MGSA, RANTES, MCP-1)

Sistema Duffy Definido por três alelos comuns: FY*A e FY*B codificam 2 antígenos antitéticos, Fya e Fyb FY*O é o principal alelo em Africanos e ocorre raramente em outras populações Estes alelos dão origem a 4 fenótipos: Fy(a+b–), Fy(a– b+), Fy(a+b+) and Fy(a–b–)

Fenotipagem Duffy Fy(a+b–), Fy(a–b+), Fy(a+b+) and Fy(a–b–)

Fenótipo Fy(a-b-) Predominante em Africanos Ocorre devido a uma mutação de ponto no gen promotor GATA-1 Resistentes a invasão pelos parasitas da malária Não se ligam a quimiocinas Genotipados como FY*B/FY*B

Fenótipo Fy(a-b-) em Africanos Mutação no sítio de ligação para o fator de transcrição eritróide específico GATA-1 afetando a expressão do antígeno nas hemácias : -33T>C na sequência TTATCT impede a transcrição do gene FY 1572 (nt) GATA-1 box -33 Ex1 Exon 2 3’ intron 125 A 1 ttacct mRNA 5’ Ex1 Ex1 Exon 2 3’ AAAn 1 336 Gp-FY NH2 COOH * Em descendentes de Africanos Fy(a-b-), o gene FY codifica FY*B

Fenótipo Fy(a-b-) Por que os indíviduos Fy(a-b-) desenvolvem anti-Fya e não desenvolvem anti-Fyb ? a maioria tem um alelo FY*B com um GATA box não funcional Fyb é expresso em outros tecidos

Genotipagem Duffy Genotipagem dos alelos FY*A e FY*B e do gen promotor GATA-1 funcional e não funcional importante para selecionar os pacientes fenotipicamente Fy(b-) que podem ser transfundidos com hemácias Fy(b+)

Pacientes Fy(b-) transfundidos com hemácias Fy(b+) Unidades Fy(b+) transfundidas 3 Fy(a+b-) FYA/FYB-33 6 a 32 6.5 25 Fy(a–b–) 1 a 57 FYB-33/FYB-33 Estes pacientes não desenvolveram anti-Fyb ou anti-Fy3

Fenótipo Fyx Fyx NH 2 59 Membrana eritrocitária COOH Ala100Thr Arg89Cys Ala100Thr 336 Substituição de aminoacido levando a redução dos níveis da proteína na membrana eritrocitária (10%)

Sistema Duffy Antígenos polimórficos: Fya, Fyb (antitéticos) alta prevalência: Fy3, Fy4, Fy5, Fy6 Anticorpos anti- Fya, anti- Fyb, anti-Fy3 IgG/Clinicamente significantes

Sistema Duffy Antígenos Fya, Fyb e Fy6 são sensíveis ao tratamento pelas enzimas ficina/papaína mas são resistentes ao tratamento por DTT e cloroquina

Sistema Duffy alo-anticorpos anti- Fya IgG, raramente IgM reativos a 37oC e AGH clinicamente significantes auto-anticorpos mimetizam alo-anticorpos

Sistema Kidd 1951: Allen et al ISBT: 009 3 antígenos: Jka, Jkb, Jk3 fenótipo null: Jk(a-b-) expressos nos eritrócitos, neutrófilos e rim

Sistema Kidd localização cromossômica: 18q12 gene: HUT11 produto gênico: proteína (391 aa) com função de transporte de uréia Jka/Jkb Asp/Asn *280 Camada bilipídica-membrana eritrocitária

Fenótipo null Fenótipo Jk(a-b-) Homozigose de um raro gen recessivo ou presença de um gen dominante inibidor In(Jk) Ausência dos antígenos Kidd Resistente a lise pela uréia 2M Desenvolvem anti-Jk3

Antígenos Kidd antígenos Kidd são resistentes ao tratamento por enzimas, DTT e cloroquina

Fenotipagem Kidd Fenotipar sempre os antígenos Jka e Jkb utilizando anti-soro comercial (monoclonal) e técnica sensível

Anticorpos Kidd Alo-anticorpos anti-Jka e anti- Jkb IgG, alguns IgM reativos a 37oC, AGH, enzimas clinicamente significantes Auto-anticorpos podem ocorrer (anti-Jka mais frequente) associado a AHAI severa

Anticorpos Kidd Difíceis de detectar: Anticorpos potentes são exceção; maioria é fracamente reativo Geralmente encontrado no soro com outros aloanticorpos Necessário métodos sensíveis(ex., AGH com hemácias tratadas com enzimas, gel teste ou polibreno) Podem não reagir com hemácias Jk(a+b+): efeito de dose podem “desaparecer” in vivo e in vitro

Impacto clínico dos anticorpos Jk: transfusão Fixam complemento Causam reações transfusionais hemolíticas imediatas severas e fatais Associados com reações transfusionais hemolíticas tardias (RTHT): severas: oliguria, falha renal Anti-Jka mais comum que anti-Jkb Causam no mínimo 1/3 das RTHT

Impacto clínico dos anticorpos Jk: DHPN Antígenos Jka, Jkb e Jk3 são bem desenvolvidos nas hemácias de RNs Raramente causam DHPN: geralmente só fototerapia Raros casos de DHPN severa e fatal 1 caso fatal case publicado para anti-Jka 2 casos fatais publicados para anti-Jkb

Transfusão Incompatível anti-Jka PAI em 21 de Abril. Nenhum anticorpo detectado (Enz/AGH!) PAI em 29 de Abril. (Observe plasma, pós RTH devido a anti-Jka 8 dias pós-transfusão

Hemólise devido a anti-Jkb Todos os pacientes transfundidos deveriam receber sangue Jk fenótipo compatível?

Genotipagem Kidd Recomendada em pacientes politransfundidos, portadores de AHAI e na presença de resultados de fenotipagem duvidosos

Sistema MNS 1927: Landsteiner e Levine ISBT: 002 Altamente polimórfico 46 antígenos: Jka, Jkb, Jk3 Fenótipos null:S-s-, En(a-), MkMk Expressos nos eritrócitos, endotélio e epitélio renal

Sistema MNS Localização cromossômica: 4q28.2-q31.1 Gene:GYPA, GYPB produto gênico:glicoforina A (GPA) e glicoforina B (GPB) Antígenos são carreados na GPA, GPB e GPA/GPB híbridas Polimorfismo associado com mutações de ponto (SNPs) e presença de genes híbridos

Antígenos do Sistema MNS Incidência n Antígenos Variavéis 4 M N S s Alta 9 Ena ENKT ENEP ENEH ENAV U ‘N’ Baixa 33 He Mia Mc Vw Mur Mg Vr Me Mta Sta Ria Cla Nya Hut Hil Mv Far sD Mit Dantu Hop Nob Or DANE TSEN MINY MUT SAT ERIK Osa HAG MARS

GPA e GPB 1 M/N 1 ’N’ 29 S/s camada bilipídica 72 131

Variantes MNS

Fenótipos null S-s-: ausência ou alteração da GPB En(a-): ausência ou alteração da GPA MkMk: ausência da GPA e GPB

Fenótipo S-s- ~1% dos afro-americanos 50% apresentam deleção do GYPB Fenótipo S-s-U- 50% apresentam mutações no exon 5 do GYPB Fenótipo S-s-U+var pode desenvolver anti-U (IgG, clinicamente significante, resistente ao tratamento enzimático

Antígenos MNS antígenos MNS são geralmente sensíveis ao tratamento por ficina/papaína e resistentes ao DTT e cloroquina

Fenotipagem MNS Fenotipagem dos antígenos antitéticos

Anticorpos MNS alo-anticorpos anti-M e anti- N IgM e IgG Reativos a 40C, TA e raramente a 37oC, AGH Não reativos por enzimas, efeito de dose Anti-S e anti-s IgG, raramente IgM reativos a 37oC, AGH Reações variáveis com ficina/papaína clinicamente significantes

Genotipagem MNS Genotipagem S e s podem ser necessárias em pacientes politransfundidos e portadores de AHAI Genotipagem na investigação de variantes

Obrigado pela atenção!