Citometria de fluxo Com material obtido em parte da: Faculdade de Medicina da Universidade Federal da Bahia Citometria de fluxo Com material obtido em parte da: Purdue University Cytometry Laboratories (http://www.cyto.purdue.edu/flowcyt/educate/pptslide.htm) Agradecimentos: Dr. Robert Murphy, Carnegie Mellon University, Pittsburgh, PA Dr. J. Paul Robinson, Purdue University Cytometry Laboratories Dr. Carleton Stewart,RPCI Laboratory of Flow Cytometry, Buffalo,NY B. H. Davis, William Beaumont Hospital, Royal Oak, Michigan

O que é a citometria de fluxo:

Avaliação de sub-populações celulares: quadrantes CD4 e CD8. 1 2 45% 2% 100 Log PE Fluorescence (CD4) 10 1 27% 3 4 26% .1 .1 1 10 100 1000 Log FITC Fluorescence (CD8)

Avaliação de ativação celular: explosão respiratória. DCFH-DA DCFH-DA DCFH H O 2 2 DCF

Análise de divisão celular. M G0 G2 DNA Analysis G1 G0 G1 s Count s G2 M 2N 4N 200 400 600 800 1000 DNA content

Análise de DNA 2N 4N Counts PI Fluorescence 200 400 600 800 1000 300 225 150 Counts 75 200 400 600 800 1000 2N 4N PI Fluorescence

Influxo de cálcio Time (Seconds) 36 72 108 144 180 Stimulation

Análise de reticulócitos RMI = 34 RMI = 0 R4 R3 R2 R1 R4 R3 R2 R1 .1 1 10 100 1000 .1 1 10 100 1000 log Thiazole Orange log Thiazole Orange

Citômetro de fluxo Detector & Mechanical Computer System Fluidics

Célula de Fluxo Injector Tip Fluorescence signals Focused laser beam Sheath fluid

90 Degree Light Scatter FALS Sensor 90LS Sensor Laser

Detectores de fluorescência Fluorescence FALS Sensor Fluorescence detector (PMT3, PMT4 etc.)

Marcadores fluorescentes Fluorescein (FITC) 400 nm 600 nm 700 nm Wavelength 500 nm Excitation Emission

Cromógenos PE-TR Conj. Texas Red PI Ethidium PE FITC Common Laser Lines 600 nm 300 nm 500 nm 700 nm 400 nm 457 350 514 610 632 488 PE-TR Conj. Texas Red PI Ethidium PE FITC cis-Parinaric acid

Imunofenotipagem: marcação celular CD2 CD4 CD # = cluster designation number

Imunofenotipagem .1 1 10 100 1000 Log FITC

Light scatter gating Side Scatter Projection Neutrophils Scale 1000 200 100 50 40 Monocytes 30 20 15 Lymphocytes 8 200 400 600 800 1000 90 Degree Scatter

Avaliação de sub-populações celulares: quadrantes CD4 e CD8. 1 2 45% 2% 100 Log PE Fluorescence (CD4) 10 1 27% 3 4 26% .1 .1 1 10 100 1000 Log FITC Fluorescence (CD8)