07 E 08 DE JUNHO DE 2010 – SÃO PAULO-SP III Workshop Perspectivas Atuais e Futuras de Estudos de Medicamentos Genéricos e Similares 07 E 08 DE JUNHO DE 2010 – SÃO PAULO-SP

PROFª DRª Clarice Madalena bueno rolim REQBIO DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇÃO DE TESTE DE DISSOLUÇÃO NO ÂMBITO DOS CENTROS DE EQUIVALÊNCIA FARMACÊUTICA – SUGESTÃO DE UM PROTOCOLO PROFª DRª Clarice Madalena bueno rolim

IMPORTÂNCIA DO TESTE DE DISSOLUÇÃO INTRODUÇÃO IMPORTÂNCIA DO TESTE DE DISSOLUÇÃO Pesquisa e desenvolvimento Produção Controle de qualidade

PESQUISA E DESENVOLVIMENTO Desenvolvimento e avaliação de novas formulações Avaliação da estabilidade Correlação in-vivo/in-vitro Registro

PRODUÇÃO/ CONTROLE DE QUALIDADE Especificação do produto Detecção de desvios de produção Uniformidade intra lote e reprodutibilidade inter lote Qualidade na formulação  tempo e armazenamento (estabilidade) Avaliar modificação no processo de produção Auxilia na decisão sobre estudos de bioequivalência

DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇÃO DE MÉTODOS DE DISSOLUÇÃO Um bom domínio sobre os pontos críticos/variáveis/operacionalização de um estudo de dissolução é importantíssimo para quem atua em CQ, desenvolvimento, registro, pesquisa.

FATORES QUE AFETAM A DISSOLUÇÃO Capacidade de umectação da partícula sólida; Propriedades físico-químicas do fármaco a ser dissolvido; Propriedades físico-químicas do meio de dissolução; Condições mecânicas que vão interferir na interação sólido-líquido.

DOCUMENTOS REGULATÓRIOS USP - <1092> The Dissolution Procedure: Development and Validation FDA – Guidance (http://www.fda.gov/cder/guidance.htm) EMEA/CHMP/ICH/2008 ICH Topic Q4B Annex 7- Dissolution Test - General Chapter BRASIL - RE Nº 310 (2004) – Guia para realização do estudo e elaboração do relatório de equivalência farmacêutica e perfil de dissolução;

SELEÇÃO DAS CONDIÇÕES DO TESTE DE DISSOLUÇÃO SELEÇÃO DO APARATO CONDIÇÕES DE TESTE  Volume e meio de dissolução  Velocidade de agitação  Especificações  Tempo de amostragem  Perfis de dissolução

 Discriminativo  Exato  Fácil transferência TESTE DE DISSOLUÇÃO  Refletir mudanças na formulação  Mudanças no processo de fabricação  Garantir a estabilidade do produto

AVALIAÇÃO DA INFLUÊNCIA DO FILTRO A validação do filtro (0,45 -0,70 µm) deve ser realizado com : Solução padrão a 100% filtrada comparada com solução padrão não filtrada; Solução amostra (dissolvida na cuba ou bequer) filtrada comparada com solução centrifugada Resultados próximos a das soluções não filtradas (±2% )

VALIDAÇÃO DE MÉTODOS DE DISSOLUÇÃO <1092> The Dissolution Procedure: Development and Validation USP

Limite de quantificação Ensaios necessários para a validação do método analítico, segundo sua finalidade: . Parâmetro Categoria I Categoria II Categoria III Categoria IV Quantitativo Ensaio limite Especificidade Sim * Linearidade Não Intervalo Precisão Repetibilidade Intermediária ** Limite de detecção Limite de quantificação Exatidão Robustez * pode ser necessário, dependendo da natureza do teste específico. ** se houver comprovação da reprodutibilidade não é necessária a comprovação da Precisão Intermediária

VALIDAÇÃO Especificidade Especificidade Linearidade Exatidão/recuperação Precisão (Workshop 2004) Linearidade Exatidão/recuperação Precisão Estabilidade das soluções

ESPECIFICIDADE  Interferência de excipientes  Interferência de revestimentos, pigmentos  Interferência âncora  Para FF liberação modificada – uma versão placebo da forma farmacêutica final pode ser mais adequada a utilização de misturas. Mesmo mecanismo de liberação que o produto

Especificidade Três amostras de placebo – todos os excipientes incluindo revestimento (equivalente a maior e menor dose) Transferir para cuba contendo o meio de dissolução a 37°C Velocidade de 150 rpm por 30 a 60 min Comparação com solução padrão 100% da dose Interferência não poderá exceder 2%

Interferência excede 2%  alternativo Método alternativo Usar espectrofotometria com segunda derivada DOSEAMENTO POR HPLC Presença de picos junto com o fármaco TR muito próximos (contamine a solução do placebo com o fármaco) Correr cromatograma com branco (meio de dissolução...) Cromatogramas: meio dissolução; sol.placebo filtrada, sol. padrão, amostra de dissolução filtrada

Exemplo - validação - teste de dissolução Fármaco modelo : cápsula 150 mg Validação em 3 Meios: a) ácido clorídrico 0,1 M b) tampão fosfato pH 6,8 c) Água - Aparato 1 (cesta) - Rotação: 75 rpm - Temperatura: 37 ºC - Volume do meio: 900 ml - Tempo: 45 minutos

Exemplo: Amostras Concentração teórica (g/mL) Absorvância ESPECIFICIDADE Avaliada através dos resultados obtidos na comparação de amostras contaminadas com excipiente e amostras não contaminadas Tabela 1 – Resultados da especificidade do método de dissolução em HCl 0,1 M Amostras Concentração teórica (g/mL) Absorvância % dissolvida Padrão 163,00 0,353 - Amostra 166,67 97,88 Amostra + placebo 0,360 99,83 Tabela 2 – Resultados da especificidade do método de dissolução de em tampão pH 6,8 Amostras Concentração teórica (g/mL) Absorvância % dissolvida Padrão 167,00 0,348 - Amostra 166,67 0,275 78,86 Amostra + placebo 0,268 76,86 Tabela 3 – Resultados da especificidade do método de dissolução em água Amostras Concentração teórica (g/mL) Absorvância % dissolvida Padrão 160,00 0,344 - Amostra 166,67 0,317 88,11 Amostra + placebo 0,311 86,44

Os valores de Desvio Padrão Relativo (DPR) encontrados na especificidade foram de 1,39% (HCL) 1,82% (tampão pH 6,8) 1,35% (água) Os dados obtidos demonstram que o teste não é afetado pela presença dos excipientes, uma vez que não houve interferência nos resultados com a adição do placebo Conclusão

LINEARIDADE Estabelecida utilizado 5 soluções padrão do fármaco (5% solvente orgânico) de -20% da dose menor até +20% da dose maior (RE 899)  Calculada pela regressão linear de quadrados mínimos

Vol. da Solução Estoque (mL) Exemplo: Preparo das soluções das curvas de calibração da dissolução nos 3 meios Vol. da Solução Estoque (mL) Volume final (mL) Concentração (µg/mL) HCl 0,1M Tampão Água 1,10 10 88,00 88,88 89,88 1,40 112,00 113,12 119,84 1,70 136,00 137,36 145,52 2,00 160,00 161,60 171,2 2,20 176,00 177,76 188,32

Exemplo: HCl 0,1 M Tampão pH 6,8 Conclusão: Os resultados obtidos atendem os critérios de aceitação para os 3 meios (Brasil, 2003 r= 0,99 USP, 32 r²= 0,98) Água

PRECISÃO  REPETIBILIDADE  PRECISÃO INTERMEDIÁRIA  Determinada na faixa de dosagem do fármaco Efeito de eventos aleatórios Diferentes dias, analistas, equipamentos

Repetibilidade Concentração Resultado Média DPR Exemplo: PRECISÃO A precisão foi avaliada por testes de Repetibilidade e Precisão intermediária Resultados da repetibilidade da dissolução em HCl 0,1 M Repetibilidade Concentração Resultado Amostra µg/mL Abs % mg/cápsula 100% 1 166,67 0,358 97,91 146,87 2 0,365 99,83 149,74 3 0,363 99,28 148,92 4 0,362 99,01 148,51 5 0,367 100,37 150,56 6 0,359 98,19 147,28 Média 99,10 148,65 DPR 0,95

Repetibilidade Concentração Resultado Média DPR Exemplo: PRECISÃO Resultados da repetibilidade da dissolução em Tampão pH 6,8 Repetibilidade Concentração Resultado Amostra µg/mL Absorvância % mg/cápsula 100% 1 166,67 0,256 76,03 114,05 2 0,250 74,25 111,38 3 0,278 82,57 123,85 4 0,282 83,76 125,63 5 0,258 76,63 114,94 6 0,263 78,11 117,17 Média 78,56 117,84 DPR 4,83

Repetibilidade Concentração Resultado Média DPR Exemplo: PRECISÃO Resultados da repetibilidade da dissolução em Água Repetibilidade Concentração Resultado Amostra µg/mL Abs % mg/cápsula 100% 1 166,67 0,240 74,41 111,61 2 0,265 82,16 123,23 3 4 0,253 78,44 117,65 5 0,239 74,10 111,14 6 0,263 81,54 122,30 Média 77,51 116,26 DPR 4,81

Os valores de Desvio Padrão Relativo (DPR) encontrados foram : 0,95% (HCL 0,1M) 4,83% (Tampão pH 6,8) 4,81% (água) RE nº 899, o DPR deve ser inferior a 5%. O método proposto apresenta repetibilidade nos 3 meios Conclusão

Precisão intermediária Exemplo: Resultados da Precisão intermediária da dissolução em HCl 0,1 M Foram preparadas e analisadas 6 amostras, conforme descrito no procedimento analítico em dia diferente das amostras analisadas na repetibilidade Precisão intermediária Concentração Resultado Amostra µg/mL Abs % mg/cápsula 100% 1 166,67 0,345 93,82 140,73 2 0,365 99,26 148,89 3 0,360 97,90 146,85 4 0,373 101,44 152,16 5 0,350 95,18 142,77 6 0,366 99,53 149,30 Média 97,86 146,78 DPR 2,93

Precisão intermediária Exemplo: Resultados da Precisão intermediária da dissolução em tampão pH 6,8 Foram preparadas e analisadas 6 amostras, conforme descrito no procedimento analítico em dia diferente das amostras analisadas na repetibilidade Precisão intermediária Concentração Resultado Amostra µg/mL Abs % mg/cápsula 100% 1 166,67 0,278 81,11 121,67 2 0,271 79,07 118,60 3 0,316 92,20 138,30 4 0,291 84,90 127,35 5 0,273 79,65 119,48 6 0,282 82,28 123,42 Média 83,20 124,80 DPR 5,86

Precisão intermediária Exemplo: Resultados da Precisão intermediária da dissolução em água Foram preparadas e analisadas 6 amostras, conforme descrito no procedimento analítico em dia diferente das amostras analisadas na repetibilidade Precisão intermediária Concentração Resultado Amostra µg/mL Abs % mg/cápsula 100% 1 166,67 0,255 78,11 117,16 2 0,281 86,07 129,11 3 0,262 80,25 120,38 4 0,270 82,70 124,05 5 0,249 76,27 114,41 6 0,248 75,96 113,95 Média 79,90 119,84 DPR 4,94

Comparação entre os dois dias de análise Precisão intermediária HCL TAMPÃO ÁGUA DIA 1 99,10 % 78,56 % 77,51 % DIA 2 97,86 % 83,20 % 79,90 % MÉDIA 98,48 % 80,88 % 78,71 % DPR 0,89 4,06 2,15

Os valores de Desvio Padrão Relativo (DPR) encontrados foram : 0,89% (HCL 0,1M) 4,06% (Tampão pH 6,8) 2,15% (água) RE nº 899, o DPR deve ser inferior a 5%. O método proposto apresenta precisão intermediária nos 3 meios Conclusão

EXATIDÃO/recuperação  Fármaco na forma pura a  20% da concentração mais baixa até  20% da concentração mais alta (liberada durante o teste) Mínimo três níveis de concentração em triplicata Quantidade de placebo (excipientes) de cada nível de concentração deve ser a mesma da dose em análise

Exatidão/recuperação Testar a mistura de excipiente e fármaco nas condições especificadas (definidas no método) Baixa solubilidade (5% solvente orgânico na solução estoque), completar volume com meio de dissolução Transferir para cuba a solução estoque diluída; 95 a 105% das quantidades pesadas.

Exatidão/recuperação Exemplo: Exatidão/recuperação HCL CA (µg/ml) CM (µg/ml) CB (µg/ml) Quantidade adicionada 130,0 80,0 30,0 Quantidade recuperada 135,0 83,0 29,5 %de recuperação 103,8% 103,7% 98,3% Média de recuperação 101,95%

Exatidão/recuperação Exemplo: Exatidão/recuperação Tampão CA (µg/ml) CM (µg/ml) CB (µg/ml) Quantidade adicionada 130,0 80,0 30,0 Quantidade recuperada 131,0 79,0 31,0 %de recuperação 100,7% 98,8% 101,6% Média de recuperação 100,4%

Exatidão/recuperação Exemplo: Exatidão/recuperação SQR??? API??? Água CA (µg/ml) CM (µg/ml) CB (µg/ml) Quantidade adicionada 130,0 80,0 30,0 Quantidade recuperada 135,0 83,0 29,5 %de recuperação 103,8% 103,7% 98,3% Média de recuperação 101,95% volume 900 ml ????

RE 310... Poderá ser dispensado No caso da inexistência de método de dissolução farmacopéico, os perfis de dissolução devem ser realizados em, pelo menos, três meios de dissolução diferentes, dentro da faixa de pH fisiológico. Os três meios devem ser validados Poderá ser dispensado nos casos em que a empresa apresentar o dossiê de desenvolvimento analítico, comprovando que o método proposto para análise é o mais adequado para o produto. nos casos em que o método de dissolução presente na(s) farmacopéia(s) não é adequado para o produto, desde que devidamente justificado.

Por que validar a dissolução em 3 meios? Por que fazê-lo em 12 cubas (6 seriam o suficiente? f1 e f2?) a análise não é simultânea... A precisão deve ser feita nas cubas? DPR de 5%? Teste de performance – qual é máximo de variação? Para permitir o uso de médias, os CV para os primeiros pontos (15 minutos, por exemplo) não devem exceder 20%. Para os demais pontos de 10% Como realizar a exatidão? Nas cubas? Exige o uso de quantidades muito grande de substância química de referência se o comprimido comercializado possuir uma grande quantidade de princípio ativo. Ex. 500 mg Deve ser realizada!!! ??????????

Obrigada !!