TÉCNICAS IMUNOLÓGICAS Parte 1

IMUNODIAGNÓSTICO: Diagnóstico laboratorial por meio de técnicas imunológicas. Busca: Anticorpo ou Antígeno no organismo do paciente por meio de ensaios de Precipitação, Aglutinação, Fixação de complemento, Neutralização ou Imunoensaios que utilizam sinalizadores da interação Ag-Ac com conjugados ligantes, como Imunofluorescência, Radioimunoensaio, Imunoenzimáticos, Imunofluorimétricos e Quimioluminiscência Outros testes: Hipersensibilidade a Antígenos: Reações intradérmicas e percutâneas.

INTERAÇÕES ANTÍGENO-ANTICORPO

KA= [Ag-Ac]  ([Ag] + [Ac]) KA= Constante intrínseca de associação

FORÇAS QUE ATUAM NAS INTERAÇÕES ANTÍGENO/ANTICORPO Moléculas que apresentam grupos laterais iônicos de cargas opostas que se atraem fortalecendo a interação Ag-Ac. Forças fracas que ocorrem devido à proximidade física entre as moléculas. A mais fraca das ligações. Ocorrem entre o núcleo de um átomo e a nuvem de elétrons de outro formando dipolos que se atraem. Atua em moléculas não polares facilitando a aproximação, os choques moleculares e as ligações.

Metodologias que utilizam reagentes marcados Metodologias que utilizam reagentes não marcados: Precipitação Aglutinação Hemólise (Fixação de Complemento) Metodologias que utilizam reagentes marcados Radioimunoensaios ELISA Imunofluorescência Western Blotting Citometria de Fluxo

IMUNOPRECIPITAÇÃO

Zona de equivalência: Ag-Ac se ligam equimolarmente formando uma rede estável. Excesso de antígeno: Os complexos podem ser dissolvidos quando há excesso de Ag pois o Ac fica livre para se ligar a novos Ag adicionados diminuindo a formação de complexos insolúveis. Excesso de Ac: Ocorre redução de imunocomplexos pois todo o Ag está precipitado e fica Ac livre no sobrenadante. Pró-Zona

IMUNODIFUSÃO

Imunodifusão radial (Mancini) Método Anticorpo no gel Antígeno no poço Ag Ac no gel Ag Concentração Diameter2 Interpretação Diâmetro do anel é proporcional à concentração do Ag Quantitativo Níveis de Ig

Imunoeletroforese/Precipitação

AGLUTINAÇÃO

INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO: TESTE DE GRAVIDEZ

AGLUTINAÇÃO EM LÁTEX: FATOR REUMATÓIDE Fator Reumatóide: Anticorpos que reconhecem epítopos presentes na fração cristalizável (Fc) da molécula de IgG. A maioria destes Acs são da classe IgM porém pode-se encontrar também Acs IgA e IgG. Teste: Visualização de aglutinação das partículas de látex revestidas pelo antígeno (no caso IgG humana ou de coelho) Interpretação: Igs com atividade FR estão presentes em pequena quantidade e com baixa avidez no soro de amior parte das pessoas. No caso de artrite reumatóide surge uma alta quantidade de FR de alta afinidade

Enfermidades em que o encontro de Fator Reumatóide é comum Causas virais HBV, HCV, Mononucleose, influenza, AIDS, pós vacinação Doenças auto-imunes Artrite Reumatóide, Lúpus Eritematoseo sistêmico, Esclerose sistêmica, polimiosite, dermatomiosite, síndrome de Sjörgren, cirrose biliar, hepatite auto-imune, etc Neoplasias Após irradiação ou quimioterapia Infecções bacterianas Tuberculose, sífilis, hanseníase, salmonelose, endocardite bacteriana subaguda, brucelose, borreliose Doenças parasitárias Malária, esquistossomose, filariose, tripanossomíase