Diagnostic Techniques in bloodstream infections: where are we going? Elizandra Silva Guimarães Aprimoramento USP 2010

BLOODSTREAM INFECTIONS Bacteremia: presença da bactéria na corrente sanguínea Mortalidade BSI nosocomiais: de 35 para 60%. Em UTIs: de 31,5 para 82,4%, nos USA, em 2009. No Brasil: segundo MS (2009), infecções nosocomiais 15,5%.

IDENTIFICAÇÃO 4 diferentes categorias: Hybridization-based PCR-based Microarray methods Protein-based

FLUORESCENCE IN SITU HYBRIDIZATION (FISH) Técnica complementar à hemocultura convencional Acelera o diagnóstico de pacientes em sepse Altamente sensível e específica para bactérias G+

www.biovisible.com/FISHex.jpg

FISH http://www.moleculardevices.com/media/mm_FISH.jpg

PCR-BASED METHODS Reduz o tempo do diagnóstico Possui boa reprodutibilidade PCR Multiplex: necessita de uma suspeita diagnóstica Risco de contaminação Impossibilidade do método de acompanhamento terapêutico

SeptiFast https://www.cobas-roche.co.uk/ “SeptiFast detects and identifies the presence of the 25 most common microorganisms in healthcare associated sepsis directly in 1.5 mL of blood, without prior incubation, in < 6 hours.” Multiplex real time PCR quantitativa e hibridização. Genotipagem Possibilidade de calcular a quantidade de bactérias presentes na amostra. Baixa sensibilidade em pequenas concentrações bacterianas Baixa especificidade para alguns microorganismos

SeptiFast https://www.cobas-roche.co.uk/

MICROARRAY METHODS Probes de DNA para genes específicos ligados a substratos sólidos (vidro, nylon) para detecção e quantificação de ácidos nucléicos provenientes de amostras biológicas, as quais são postas para hibridar com o DNA fixado no array. Detecção, indentificação e genotipagem. Importante ferramenta epidemiológica. Pequena quantidade de amostra Relativa baixa sensibilidade de microarrays de fluorescência.

MICROARRAY biotech.biology.arizona.edu/.../microaray.jpg

PROTEIN-BASED METHODS Baseado em espectroscopia vibracional, na qual se utiliza radiação eletromagnética para testar o comportamento vibracional de proteínas observando-se a absorção ou espalhamento dessa radiação. Método complementar

PERSPECTIVAS Maior rapidez Diminuição de custos Utilização de técnicas conjuntas Aumento da sensibilidade e especificidade dos métodos Importância epidemiológica