PROF: DIOGO SILVA Isolamento de DNA e RNA. INFORMAÇÕES.

Apresentação em tema: "PROF: DIOGO SILVA Isolamento de DNA e RNA. INFORMAÇÕES."— Transcrição da apresentação:

1 PROF: DIOGO SILVA Isolamento de DNA e RNA

2 INFORMAÇÕES

3 Isolamento de DNA e RNA Ácidos nucléicos  DNA e RNA. Objetivo: Estudar as informações que as moléculas carregam. Estudo e análise das informações Isolamento Necessário

4 Material para isolamento Bulbo do cabelo Ossos Tecidos (em geral ) Gordura (muito pouco) Sangue ???? Hemácias x células de defesa (células brancas) Anucleadas Sem DNA Nucleadas Com DNA

5 Área de Pesquisa Pesquisa com DNA: Diagnósticos (Bactérias, Vírus de DNA) Medicina Forence (Paternidade, identificação criminal) Reprodução (Sexagem Fetal) Epedemiologia (Variabilidade genética de cepas) Pesquisa com RNA: Diagnóstico (vírus de RNA) Análise de Expressão génica

6 Métodos de Isolamento Utiliza reagentes que tem objetivo a lise da membrana celular. Exposição do DNA e RNA. Reagentes: Fenol/Clorofórmio ( método padrão- mais utilizado) Detergentes ( SDS, Xilex) Ácidos Fenólicos Kits Perigo!!!! Uso de EPI

7 Isolamento de DNA Processamento Manual Fenol/Clorofórmio ( método padrão- mais utilizado) Detergentes ( SDS, Xilex) Kits (binding magnético e coluna) Extração Bancada Binding Magnético Placa com reagente que liga-se ao DNA Coluna DNA retido na coluna

8 Isolamento de RNA Processamento Manual Ácidos Fenólicos ( TRIZOL ®, TRI-REAGENTE ®, QIAZOL ® ). Cloreto de Lítio (planta) Kits (binding magnético e coluna)

9 Isolamento automatizado de DNA e RNA Grande demanda Extratores de DNA e RNA

10 Análise do Isolado Após a etapa de extração Objetivo: Avaliação da qualidade Medir a concentração Métodos: Eletroforese em gel de agarose Espectrofotômetro ( comprimento de onda DNA = 280 e RNA= 260)

11 Análise do Isolado Gel de AgaroseEspectrofotômetro

12 Análise do Isolado PCR - Reação em Cadeia da Polimerase Sequenciamento Southern Blot Northern Blot