NeuroBook: Conversas entre neurónios

Apresentação em tema: "NeuroBook: Conversas entre neurónios"— Transcrição da apresentação:

1 NeuroBook: Conversas entre neurónios
Estágio de Verão - Ciência Viva CNC Catarina Fernandes Helga Afonso Mariana Santos Mónica Ferreira

2 Estímulo de morte celular
Hipocampo Aprendizagem e memória Isquémia OGD Células do hipocampo Fixação das células de modo a observar a morfologia nuclear no microscópio de fluorescência Células mortas = cromatina condensada Hoescht = azul escuro Células vivas = cromatina dispersa Hoescht = azul claro Estímulo de morte celular

3 Quantificação de proteínas
Amostras de proteína Incubação Espectofotómetro

4 Isolamento de neurónios de hipocampo de embriões de rato

5 Hipocampo O hipocampo é uma estrutura localizada nos lobos temporais do cérebro humano, considerada a principal sede da memória e importante componente do sistema límbico. Esta estrutura denomina-se “hipocampo” devido à sua forma curva, que se assemelha a um cavalo- marinho (Grego: hippos = cavalo, kampi = curva).

6 Funções do hipocampo Esta estrutura é muito importante :
Para converter a memória a curto prazo em memória a longo prazo. Pois permite ao mamífero comparar as condições de uma ameaça actual com experiências passadas semelhantes, permitindo-lhe, assim, escolher qual a melhor opção a ser tomada para garantir o seu bem- estar. As lesões no hipocampo impedem a pessoa de construir novas memórias e a pessoa tem a sensação de viver num lugar estranho onde tudo o que experimenta simplesmente se desvanece, mesmo que as memórias mais antigas anteriores à lesão permaneçam intactas.

7 Protocolo Sacrificou-se o rato fêmea;
Retiraram-se os embriões do seu interior; Extraímos os seus cérebros e de seguida os 2 hipocampos de cada cérebro; Colocámos os hipocampos em soluções, que permitiu extrair os neurónios para depois os pôr em cultura.

8 Imunocitoquímica em Cultura de Neurónios
Cultura de neurónios com 8DIV

9 Imunocitoquímica Conjuntos de técnicas que utilizam anticorpos para identificar macromoléculas, no nosso caso, para identificar as proteínas.

10 Protocolo Fixação; Permeabilização; Bloqueio;
Incubação com os anticorpos primários; Incubação com os anticorpos secundárias; Preparação das lâminas e lamelas; Visualização ao microscópio de fluorescência.

11 Marcámos a PSD-95 e a Geferina com os anti-corpos de fluorescência
Marcámos a PSD-95 e a Geferina com os anti-corpos de fluorescência. Assim foi possível visualizarmos ao microscópio de fluorescência. A PSD é específica das sinapses glutamatérgicas (excitatórias) enquanto que a Geferina é específica de sinapses gabaérgicas (inibitórias).

12 Evolução da PSD95 de neurónios do hipocampo 8DIV, 12 DIV e 15 DIV

13 Evolução da Geferina de neurónios do hipocampo 8DIV, 12 DIV e 15 DIV

14 PCR Polymerase Chain Reaction

15 Normalmente usado: Laboratórios de investigação médica e biológica;
Detecções de doenças hereditárias; Identificação de “impressões digitais” genéticas; Construção de relações entre espécies; Clonagem de genes; Testes de paternidade; Genotipagem.

16 PCR consiste em três fases: Desnaturação, Annealing e Extensão

17 Gráfico obtido a partir do termociclador.

18 O produto do PCR pode ser visualizado após a electroforese em gel de agarose e o seu tamanho é estimado com padrões lineares de DNA. Electroforese-gel de agarose

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