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Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho.

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Apresentação em tema: "Microscopia de campo escuro. Campo claroCampo escuro + filtro vermelho."— Transcrição da apresentação:

1 Microscopia de campo escuro

2 Campo claroCampo escuro + filtro vermelho

3 Microscopia de campo escuro Campo escuro: bloqueio dos raios centrais, permitindo apenas iluminação oblíqua na amostra. LUZ absorção Luz captada pela objetiva = refração + reflexão reflexão fluorescência refração

4 Tipo de contraste no campo escuro (iluminação oblíqua) Tipo de contraste no campo escuro (iluminação oblíqua) 1) Negativo: amostra é mais clara do que o plano de fundo, que fica escuro. Microscopia de campo escuro Contraste = (I f - I a ) x 100 I f

5 Contraste com campo escuro Contraste com campo escuro - Os raios não desviados são obliterados; - Apenas raios desviados são captados pela objetiva. amostra Distância focal condensador Lente do tubo Plano da imagem ocular objetiva Raios desviados Raios não desviados Microscopia de campo escuro

6 O que a técnica de campo escuro faz? O que a técnica de campo escuro faz? 1) Contraste negativo -Bloqueia os raios não desviados centrais, permitindo apenas a passagem de raios desviados num ângulo suficiente para serem captados pela objetiva; - os eventos de refração e reflexão são responsáveis pela produção de raios desviados; - a amostra fica clara sobre um fundo escuro; - cria uma aparência tridimensional da amostra; - a resolução é a mesma do campo claro. Microscopia de campo escuro

7 Configuração Configuração condensador Microscopia de campo escuro objetiva Luz não coletada pela objetiva Luz difratada pela amostra amostra Anel de campo escuro Trabalha-se nos planos da imagem conoscópica Só entra luz na objetiva se houver material com índice de refração maior que o da água.

8 Sem amostra Com amostra Microscopia de campo escuro

9 Dados técnicos Dados técnicos 1) A cessórios obrigatórios: anel de campo escuro para o condensador; Não há objetivas especiais para esta técnica. OBS: alternativamente, pode-se usar um anel de fase para objetiva de alta AN (100x) com uma objetiva de baixa AN. Microscopia de campo escuro Campo escuro pode ser usada em luz transmitida e refletida e em estereoscopia.

10 Dados técnicos: fatores que Dados técnicos: fatores que influenciam no tamanho do anel influenciam no tamanho do anel - Posição do anel no condensador; - AN da objetiva e do condensador; - O número de campo da ocular; - Aumento da ocular (menor aumento requer anel mais largo); - Índice de refração do meio de montagem (maior IR requer anel mais largo). Microscopia de campo escuro

11 Dados técnicos do anéis Dados técnicos do anéis Acessórios obrigatórios : opções de anéis de campo escuro. Microscopia de campo escuro

12 Dados técnicos- como fazer Dados técnicos- como fazer - realiza o alinhamento Koehler; - seleciona o anel de campo escuro; - movimenta-se o condensador verticalmente até obter o campo escuro e com a amostra brilhante. Microscopia de campo escuro incorretocorreto

13 Técnicas e contraste Técnicas e contraste AmostraTécnicaContraste TransparenteCampo claro2-5% CoradaCampo claro25% TransparenteContraste de fase15-20% TransparenteContraste diferencial de interferência15-20% TransparenteCampo escuro60-75% TransparenteFluorescência60-75% Microscopia de campo escuro

14 Indicações Indicações - Objetos muito pequenos, cuja visualização é difícil sobre um fundo claro; - Pode permitir a detecção de estruturas muito menores que o poder de resolução do microscópio (ex.: 0.02 m), mas isto não significa que a técnica aumenta a resolução. - Em combinação com técnica de fluorescência; Exemplos: - bactéria; - organelas celulares, - polímeros, cílios, flagelos, microtúbulos, filamentos de actina; - partículas de prata e ouro usadas em técnicas de histoquímica. Microscopia de campo escuro

15 Limitações Limitações - amostras com muitos pontos de causam espalhamento podem não produzir um contraste adequado; - estruturas que causam muito espalhamento podem mascarar outras estruturas mais delicadas que espalham pouca luz. Microscopia de campo escuro

16 Microscopia de contraste de fase Imagens Imagens

17 Raiz de dente humano Preparo por desgaste Sal (cloreto de sódio)


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