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CULTURA E TESTE DE SENSIBILIDADE: TRADIÇÃO X AUTOMAÇÃO

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Apresentação em tema: "CULTURA E TESTE DE SENSIBILIDADE: TRADIÇÃO X AUTOMAÇÃO"— Transcrição da apresentação:

1 CULTURA E TESTE DE SENSIBILIDADE: TRADIÇÃO X AUTOMAÇÃO
III Encontro Nacional de Tuberculose Salvador, 18 a 21 de junho de 2008 Maria Alice da Silva Telles

2 Teste de sensibilidade
PROFICIÊNCIA Teste de sensibilidade

3 FATORES QUE PODEM INFLUIR NO RESULTADO DO TESTE
PROFICIÊNCIA DA EQUIPE Cultura de micobactérias e identificação Critérios de resistência PADRONIZAÇÃO E REALIZAÇÃO DOS PROCEDIMENTOS A padronização é difícil e os procedimentos são complexos

4 FATORES QUE PODEM INFLUIR NO RESULTADO DO TESTE
POTÊNCIA E ESTABILIDADE DA DROGA Cálculo da potência Condições de armazenamento Diluição correta Inativação pelo calor (coagulação) Prazo de validade ATIVIDADE DA DROGA Alteração da atividade de determinadas drogas quando incorporada em diferentes meios de cultura

5 FATORES QUE PODEM INFLUIR NO RESULTADO DO TESTE
TIPO DO MEIO DE CULTURA (sólido, líquido) pH do meio Metodologia usada para o teste Padronização do inóculo QUALIDADE DA CULTURA ORIGINAL Crescimento,idade da cultura, meio de cultura LEITURA E RELATO DOS RESULTADOS Tempo de incubação Leitura – contagem das colônias interpretação dos resultados – critério de resistência

6 Teste de sensibilidade
Tradicional e automatizado

7 MÉTODOS CONVENCIONAIS LOWENSTEIN JENSEN (LJ)
LIMITAÇÕES PREPARO DO MEIO LJ, DAS SOLUÇÕES ESTOQUE DE DROGAS DILUIÇÕES DA DROGA PARA INCORPORAÇÃO NO MEIO LJ COAGULAÇÃO DO MEIO COM AS DROGAS - POTÊNCIA DA DROGA

8 MÉTODOS CONVENCIONAIS LOWENSTEIN JENSEN (LJ)
LIMITAÇÕES LEITURA – INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS POR TÉCNICO EXPERIENTE (SUBJETIVO) MÉTODO DAS PROPORÇÕES –NECESSIDADE DE FRASCOS GRANDES E SEMEADURA DE DUAS DILUIÇÕES PARA CONTAGEM DAS COLÔNIAS O QUE limita a capacidade resolutiva do laboratório (limita o número de testes realizados por mês) TEMPO DE INCUBAÇÃO: 28 e 42 dias

9 MÉTODO AUTOMATIZADO Princípio – Baseado no método das proporções
Monitoramento contínuo do crescimento Redução do tempo do exame TEMPO DE INCUBAÇÃO - 5 A 12 DIAS (SIRE) E 7 A 21 DIAS (PZA) LISTAGEM COM INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS Controle maior dos fatores que influenciam a qualidade do teste

10 MÉTODO AUTOMATIZADO VANTAGENS
CONTROLE DE QUALIDADE DOS MEIOS, DAS DROGAS E DO ENRIQUECIMENTO A DROGA É LIOFILIZADA NA QUANTIDADE ADEQUADA PARA UM LOTE DE 40 TESTES A DILUIÇÃO DAS DROGAS É FEITA COM ÁGUA DESTILADA NO MOMENTO DO USO - PADRONIZADA

11 Validação do método automatizado no Brasil
Giampaglia CMS, Martins MC, Vieira GBO, Vinhas AS, Telles MAS, Palaci M, Marsico AG, Hadad DJ, Mello FCQ, Fonseca LS, Kritski A. Multicentre evaluation of an automated BACTEC 960 system for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis. Int J Tuberc Lung Dis 11(9): , 2007.

12 VALIDAÇÃO DO MÉTODO BACTEC MGIT960 NO BRASIL
ESTUDO COMPARATIVO EM 3 LABORATÓRIOS USANDO AS MESMAS CEPAS EM ESQUEMA TRIPLO CEGO INSTITUTO ADOLFO LUTZ – SÃO PAULO RAZÃO DA RESISTÊNCIA x MGIT  960 UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPÍRITO SANTO BACTEC 460 x MGIT  960 UNIVERSIDADE ESTADUAL DO RIO DE JANEIRO MÉTODO DAS PROPORÇÕES x MGIT  960

13 VALIDAÇÃO DO MÉTODO BACTEC MGIT960 NO BRASIL
Comparação dos resultados das cepas Sensíveis e Resistentes (Método PADRÃO* e MGIT960) *MÉTODO USADO NOS LABORATÓRIOS ONDE FORAM REALIZADOS OS ESTUDOS

14 INCUBAÇÃO DOS TESTES NO EQUIPAMENTO
Leitura única do código de barras para o conjunto de tubos do TS

15 REMOÇÃO DO TESTE FINALIZADO
TS FINALIZADO SEM ERRO TS FINALIZADO DETECÇÃO ERRO + ! O SISTEMA INDICA QUE O TESTE FOI FINALIZADO

16 EMISSÃO DE RELATÓRIO COM INTERPRETAÇÃO RESULTADOS
(SENSÍVEL-S, RESISTENTE-R, ERRO) E200

17 LABORATÓRIO DE MICOBACTÉRIAS DO INSTITUTO ADOLFO LUTZ 2004 E 2005
TEMPO DE LIBERAÇÃO DOS RESULTADOS DOS TESTES DE SENSIBILIDADE PARA M. tuberculosis LABORATÓRIO DE MICOBACTÉRIAS DO INSTITUTO ADOLFO LUTZ E 2005 % N0 DE CEPAS COM RESULTADOS LIBERADOS TEMPO EM DIAS DESDE O RECEBIMENTO ATÉ A LIBERAÇÃO DO RESULTADO

18 CULTURA

19 MÉTODOS CONVENCIONAIS LOWENSTEIN JENSEN (LJ)
VANTAGENS CUSTO BAIXO – MAIS ACESSÍVEL – R$ 5,00 Menos contaminação Visualização do aspecto da colônia

20 MÉTODO AUTOMATIZADO diferencial
Redução do tempo Maior positividade – incremento de 20 a 30% +

21 MÉTODO AUTOMATIZADO LIMITAÇÕES CUSTO DO MEIO É ALTO
Cultura meio líquido manual – R$ 13 a 15,00 Cultura automatizada – R$ 19 a 25,00 MEIO LÍQUIDO: POSSÍVEL CONTAMINAÇÃO MAIOR Não visualiza a colônia

22 CUSTO EFETIVIDADE

23 CUSTO (efetividade??) Custo envolve : Efetividade envolve:
Infra-estrutura do laboratório (água, luz, equipamentos, limpeza, biossegurança, etc) Horas de trabalho (salário) Categoria profissional (salário) Material do teste Efetividade envolve: Agilidade do resultado Introdução da terapia correta o mais cedo possível Redução de transmissão Redução de resistência (transmissão de resistência) Redução de tempo de internação Agilização da cura Evitar a morte

24 CUSTOS Meio sólido Cultura - R$ 5,00 Teste de sensibilidade R$ 60,00
Meio líquido Cultura manual R$ 13,00 – 15,00 Automatizada R$ 19,00 – 25,00 TS automatizado R$ 200,00

25 TEMPO SÓLIDO AUTOMATIZADO CULTURA TS CULTURA TS 15 a 60 dias

26 TB or not TB??? Fator corda – baciloscopia + indicativo de TB
atípico indicativo de MNT PNB – ácido p-nitrobenzóico negativo TB positivo MNT Monteiro PHT, Martins MC, Ueki SMY, Giampaglia CMS, Telles MAS.Cord formation and colony morphology for the presumptive identification of Mycobacterium tuberculosis complex. Brazilian Journal of Microbiology (2003) 34:

27 Publicações Giampaglia CMS, Martins MC, Inumaru VTG, Butuem IV, Telles MAS. Evaluation of a rapid differentiation test for the Mycobacterium tuberculosis complex by selective inhibition with –nitrobenzoic acid and thiophene-2-carboxylic acid hydrazide. Int J Tuberc Lung Dis 9(2):206–209, 2005. Giampaglia CMS, Martins MC,Chimara E, Oliveira RS, Vieira GBO, Marsico AG, Mello FCQ, Fonseca LS, Kritski A, Telles MAS. Differentiation of Mycobacterium tuberculosis from other mycobacteria with –nitrobenzoic acid using MGIT960. Int J Tuberc Lung Dis 11(7): , 2007.


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