Aluno: Marcell Crispim

Apresentação em tema: "Aluno: Marcell Crispim"— Transcrição da apresentação:

1 Aluno: Marcell Crispim
Universidade de São Paulo – USP Instituto de Ciências Biomédicas – ICBII Departamento de Parasitologia Cinética Enzimática Aluno: Marcell Crispim

2 Enzima Geralmente possuem composição protéica.
São catalisadores de reações. Alteram a velocidade da reação mas não o equilíbrio. Estão no centro dos processos bioquímicos. Sua deficiência ou excesso de atividade pode caracterizar uma doença. São importantes alvos terapêuticos contra microrganismos.

3 Enzima Comparação com outras enzimas
Caracterizar a enzima Definir parâmetros da sua atividade enzimática Cinética enzimática Comparação com outras enzimas Determinação do seu papel biológico

4 Cinética enzimática Baseia-se na determinação da velocidade da reação e como ela se modifica em resposta a mudanças nos parâmetros experimentais.

5 Concentração de susbstrato Ativadores ou inibidores
Cinética enzimática Funções Medir a velocidade em que ocorre uma reação. Estudar a influência de alguns fatores nessa velocidade. Temperatura pH Concentração de susbstrato Quantidade de enzima Ativadores ou inibidores

6 Cinética enzimática Funções Otimizar a reação
Estabelecer critérios para o seu controle

7 Influência da [S]

8 Influência da [S] Estudo do efeito da concentração do substrato
medida da velocidade da reação.

9 Influência da [S]

10 1913 Leonor Michaelis e Maul Menten
Michaelis - Menten 1913 Leonor Michaelis e Maul Menten Consideram que uma reação enzimática ocorre em dois passos: LENTA onde k1, k2, k3 e k4 são as constantes de velocidade de cada etapa.

11 Michaelis - Menten Podemos simplificar a reação: Portanto:
(eq. 1) Portanto: A velocidade de formação de produto é dependente de [ES].

12 Michaelis - Menten Como [ES] não é facilmente medida, precisamos descobrir uma expressão alternativa para [ES]. Excesso de substrato ESTADO ESTACIONÁRIO [ES] permanece praticamente constante durante todo o tempo.

13 Michaelis - Menten No estado estacionário:
Velocidade de formação de ES = Velocidade de decomposição de ES

14 Michaelis - Menten Para simplificar a equação 4, foi definida uma constante, KM, conhecida como Constante de Michaelis: KM é a razão da soma das taxas de desaparecimento do complexo ES pela taxa de formação deste.

15 Michaelis - Menten desaparecimento formação quando KM é pequeno, k1 é relativamente grande e a barreira de energia livre para a formação do complexo é pequena. KM, assim, reflete uma habilidade da enzima a se ligar aos substratos e realizar a catálise.

16 Michaelis - Menten Substituindo a eq. 5 na eq. 4, teremos:

17 Michaelis - Menten Na reação, pode-se assumir que o sítio da enzima pode estar ocupado ou livre. Assim a enzima existe em duas formas: A forma livre E, e a forma ligada ES.

18 Michaelis - Menten Substituindo a eq. 7 em 6, temos:
Que pode ser transformada em:

19 Michaelis - Menten Podemos substituir esta eq. 9 na da velocidade inicial da reação

20 Michaelis - Menten Vmáx = k3[E]TOTAL (eq. 11)
[E]TOTAL= [ES] Vmáx = k3[E]TOTAL (eq. 11) Em saturação de substrato Quando a enzima estiver saturada de substrato a [ES] será igual à [E]total pq toda a enzima estará ligada ao substrato

21 Michaelis - Menten Então a equação 10, pode ser representada por:
Vmáx = k3[Et] (eq. 11) Equação de Michaelis-Menten

22 Michaelis - Menten Temos: KM = [S]. Ou seja, KM corresponde à concentração de S necessária para se atingir a metade da velocidade máxima!

23 Michaelis - Menten

24 Michaelis - Menten A equação de Michaelis-Menten pode ser representada na forma inversa (eq. 13) que representa uma equação do tipo y =ax+ b: Essa é uma equação de reta (y = ax + b) em que a inclinação (a) é igual a KM/Vmáx e o intercepto (b) é igual a 1/Vmáx, Essa é a forma mais comum de se determinar os parâmetros cinéticos (KM e Vmáx).

25 Michaelis - Menten

26 Michaelis - Menten Efeito da Concentração de Enzima na Velocidade da Reação concentração de substrato seja alta aumento na concentração de enzima um aumento na velocidade de reação

27 Michaelis - Menten Quando fazemos o gráfico da velocidade da reação (V) em função da concentração de enzima, podemos observar uma relação linear:

28 Michaelis - Menten Ao se utilizar uma concentração maior de enzima, VMAX será maior utilizando-se a mesma concentração de substrato Vmax é maior em [E] maior, utilizando a mesma [S]

29 MUITO OBRIGADO!!