Érika Carvalho Silva Disciplina: Termogênese nos seres vivos

Apresentação em tema: "Érika Carvalho Silva Disciplina: Termogênese nos seres vivos"— Transcrição da apresentação:

1 Estudo do papel da proteína CIDEA no controle do estresse oxidativo celular
Érika Carvalho Silva Disciplina: Termogênese nos seres vivos Professora: Ana Maria Landeira

2 Família Cide (Liang et al., 2003) (Cory, 1998)

3 Cidea e Cideb como indutoras de apoptose
(Inohara et al., 1998)

4 Cide3 como indutora de apoptose
293T controle 293T CIDEB 293T CIDE3 (Liang et al., 2003)

5 Expressão das proteínas Cide em humanos
(Inohara et al., 1998) (Liang et al., 2003)

6 Camundongos knockout

7 CIDEA e UCP1

8 AMPK e suas vias de sinalização

9 AMPK e Cidea

10 Cadeia Transportadora de Elétrons
Modelo proposto Cidea MOM H+ H+ H+ H+ UCP F0 Cadeia Transportadora de Elétrons MIM ADP F1 H+ H+ ATP

11 Cadeia Transportadora de Elétrons
Knockout MOM H+ H+ H+ H+ UCP F0 Cadeia Transportadora de Elétrons MIM ADP F1 H+ H+ ATP

12 Cadeia Transportadora de Elétrons
Knockout MOM H+ H+ H+ H+ UCP F0 Cadeia Transportadora de Elétrons MIM ADP F1 H+ H+ ATP

13 Cadeia Transportadora de Elétrons
Superexpressão Cidea Cidea Cidea MOM H+ H+ H+ H+ UCP F0 Cadeia Transportadora de Elétrons MIM ADP F1 H+ H+ ATP

14 Cadeia Transportadora de Elétrons
Superexpressão Cidea Cidea Cidea MOM H+ H+ H+ H+ UCP F0 Cadeia Transportadora de Elétrons MIM ADP F1 X H+ H+ ATP

15 Cadeia Transportadora de Elétrons
Superexpressão Cidea Cidea Cidea MOM H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ UCP F0 Cadeia Transportadora de Elétrons MIM ADP F1 X H+ H+ ATP

16 Cadeia Transportadora de Elétrons
Superexpressão Cidea Cidea Cidea MOM H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ UCP F0 Cadeia Transportadora de Elétrons MIM ROS ADP F1 X H+ H+ ATP

17 Cadeia Transportadora de Elétrons
Superexpressão Cidea Cidea Cidea MOM H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ H+ UCP F0 Cadeia Transportadora de Elétrons MIM ROS ADP F1 X H+ H+ ATP Morte celular!!!

18 Objetivo Caracterizar o papel da proteína Cidea no controle do estresse oxidativo

19 1) Estabelecimento do modelo
Linhagem Jurkat de célula T e células primárias Western blot para Cidea e UCP2

20 2) Colocalização e inibição de UCP2 por Cidea
Microscopia confocal Imunoprecipitação de proteínas FACS para DiOC6

21 3) Efeito do estresse oxidativo: tratamento com H2O2
Célula Cidea-KO é mais resistente ao tratamento com peróxido de hidrogênio? Célula UCP2-KO produz mais espécies reativas de oxigênio? Após o tratamento com peróxido de hidrogênio, ocorre diminuição da interação entre Cidea e UCP2? Doses celulares letais de peróxido de hidrogênio associado a tratamento com FCCP em Cidea- KO inibe essa morte?

22 AMPK na proteção celular do estresse oxidativo

23 AMPK na proteção celular do estresse oxidativo

24 4) Papel de Cidea na regulação de AMPK e outras vias metabólicas
Ocorre fosforilação de AMPK após tratamento com peróxido? Cidea é capaz de ubiquitinar AMPK e levá-la para a degradação? Não degradação de AMPK necessária para sobrevivência após tratamento com peróxido? O que ocorre com enzimas da via glicolítica?

25 5) Cidea como sensor redox?
Modelagem molecular e localização das cisteínas. Mutagênese sítio-dirigida das cisteínas para avaliar capacidade de responder ao estresse oxidativo.

26

27 Aceito para The Journal of Biologial Chemistry

28 Outra proposta! Será um inibidor das proteínas CIDE um futuro medicamento anti-obesidade???