Orientador: Profo Dr Gonçalo Amarante Guimarães Pereira

Apresentação em tema: "Orientador: Profo Dr Gonçalo Amarante Guimarães Pereira"— Transcrição da apresentação:

1 Orientador: Profo Dr Gonçalo Amarante Guimarães Pereira
Modificação de linhagens industriais de Saccharomyces cerevisiae para o aumento da produtividade de álcool e floculação condicional Silvia Kazue Missawa Orientador: Profo Dr Gonçalo Amarante Guimarães Pereira

2 Introdução Saccharomyces cerevisiae Utilizado processo fermentativo
Etanol Cachaça Cerveja Vinho O que é fermentação??

3 GLICÓLISE Vias Metabólicas FERMENTAÇÃO RESPIRAÇÃO (Schüller, 2003)

4 Processo Fermentativo Industrial
(Meleiro & Maciel-Filho, 2000)

5 Genes Floculação Proteína de membrana
FLO1 e FLO5: agregados são reprimidos por manose FLO10: agregados são reprimidos na presença de açucares (maltose, sacarose e glicose)

6 Processo Floculação

7 Floculação [ ] cálcio [ ] etanol nutrientes temperatura pH
atividade mitocondrial

8 Atividade Mitocondrial
Deficiência genoma da mitocôndria Altera características da superfície da célula PET191 - gene nuclear (Hutter &Oliver, 1998) montagem subunidades citocromo C oxidase Rompimento PET191 – aumento na produção de etanol (43%)

9 CONTROL OF SACCHAROMYCES CEREVISIAE FLOCCULATION BY SUGAR FOR INDUSTRIAL ETHANOL PRODUCTION
Cunha, A.F. 1 , Missawa, S.K.1 , Gomes, L.H.2, Reis, S. F.3 and Pereira, G.A.G. 1 (1) Laboratório de Genômica e Expressão - Departamento de Genética e Evolução Instituto de Biologia –Universidade Estadual de Campinas - Campinas – São Paulo – Brazil (2) Universidade de São Paulo – ESALQ – Laboratório de Genética de Leveduras –Piracicaba, SP (3) Departamento de Parasitologia - Instituto de Biologia - Universidade Estadual de Campinas – Campinas - São Paulo – Brazil Submitted to: FEMS YEAST RESEARCH

10 Objetivos Artigo Floculantes condicionais
Processo pedido patente (INPI no ) Transferir a tecnologia para indústria Engenharia genética Uso promotor forte e condicional

11 Construção com o promotor MoxBB

12 Northern blot

13

14 Construção com o promotor ADH2

15 Transformação de linhagem industrial

16 Problemas Desfloculação dos agregados do gene FLO5
Floculação antecipada na linhagem industrial

17 Objetivos Avaliar o gene FLO10
Analisar crescimento das células e produtividade de etanol em linhagens de laboratório e industriais Deletar o gene PET191 para aumentar a produtividade de etanol

18 Materiais e Métodos Linhagens S. cerevisiae: W303-1a, JD7-7C, HD9315b
Pedra2, Fleishman, Uvarum Plasmídeos YEp352-FLO5, pYADE4, pYADE4-FLO5

19 Amplificação e Clonagem do gene FLO10
Amplificação por PCR Clonagem em P-gem (Promega) Digestão Clonagem no pYADE4

20 Extração de RNA e Northern Blot
Testes Floculação: Tempo de sedimentação Isolamento e caracterização de linhagens selvagens: RAPD Teste produtividade: Cromatógrafo a gás, ou destilação e desimetria

21 Resultados Parciais Amplificação do gene Flo10
FLO10BamF 5´ CGCGGATCCATGCCTGTGGCTGCTCG 3´ FLO10SalR 5´ ACGCGTCGACCTATTAAACGATTG CCAG 3´. Clonagem do gene Flo10 em Pgem SalI (3 e 3,5Kb) BamHI/SalI (3 e 3,5Kb) ScaI/SalI (1,1; 1,5; 1,8; 2,0Kb)

22 Construção do pYADE4-FLO10

23 Extração RNA e Northern

24 Seleção por canavanina em linhagens industriais

25 Cassete integrativo

26 Próximas Etapas Clonar o gene FLO10 com seu próprio promotor
Transformação de linhagens industriais com cassete integrativo Desenvolver estratégia de desfloculação (FLO10) Deleção de PET191 Testes de floculação e produtividade