Contextualização Um caso que chocou o país! Técnicas de microbiologia http://www.youtube.com/watch?v=HVbzICCJu-U&list=WLFGpiEnH7QcQYrFWqP-DFo-6D2QELjd5Y Técnicas de microbiologia Nos primórdios da imunologia, dois pesquisadores defendiam pontos de vistas que pareciam contrários; Elie Metchnikoff acreditava que a resposta inata dos macrófagos abrangia toda a defesa do hospedeiro, enquanto Paul Ehrlich defendia a teoria humoral da imunidade; https://www.youtube.com/watch?v=-TnHCd4sY24&list=PL52AFB8EF8CB7E4CD Mariana Bridi Costa

Células Procarióticas e-mail: ft_martins@yahoo.com MICROBIOLOGIA – AULA1 Fundamentos de Microbiologia e Anatomia Funcional das Células Procarióticas QUESTÕES PARA AS PROVAS; CONTEÚDO DAS AULAS; ATIVIDADES ON-LINE; BLOG: http://chicoteixeira.wordpress.com chico.m.teixeira TWITTER: @ChicoMTeixeira MSN: ft.martins@hotmail.com e-mail: ft_martins@yahoo.com

Os micróbios em nossas vidas Neve fabricada com Snomax, uma proteína produzida por bactérias geneticamente modificadas, que faz com que a água congele em temperatura mais elevada que a normal;

Os micróbios em nossas vidas Tendência a associar microrganismos somente a infecções desagradáveis; No entanto, Certas bactérias e algas realizam a fotossíntese Microrganismos e síntese de vitaminas Microrganismos do solo Microrganismos marinhos e de água doce

Os micróbios em nossas vidas Os microrganismos também possuem muitas aplicações comerciais; Utilizados na síntese de produtos químicos; Na produção de alimentos; Na produção de substâncias terapêuticas através da engenharia genética; Embora somente uma minoria seja patogênica, devemos considerar que as doenças infecciosas ainda são a maior causa de morte no mundo;

Uma breve história da microbiologia Observação das células em 1665 por Robert Hooke Cartas de Leewenhoek à Sociedade Real de Londres descrevendo os “animálculos

O debate sobre a geração espontânea Muitos cientistas e filósofos acreditavam que algumas formas de vida poderiam aparecer espontaneamente da matéria morta; GERAÇÃO ESPONTÂNEA Outros cientistas preconizavam que células vivas poderiam surgir somente a partir de células vivas preexistentes; TEORIA DA BIOGÊNESE Experimentos de Pasteur que refutaram a teoria da geração espontânea

A idade de ouro da Microbiologia

A idade de ouro da Microbiologia Teoria do germe e da doença Postulados de Koch

A idade de ouro da Microbiologia Outras descobertas importantes: 1888 – Roux e Yersin – toxina diftérica; 1890 – Von Behring e kitasato – antitoxina no sangue de indivíduos em recuperação da difteria; Celularistas Humoralistas

Técnicas de cultura pura Os microrganismos na natureza normalmente existem em culturas mistas, com muitas espécies diferentes ocupando o mesmo ambiente; Portanto, o primeiro passo é isolar as diferentes espécies contidas em uma amostra; Para o isolamento dos microrganismos devemos utilizar técnicas de semeadura e meios indicados de acordo com a espécie:

Técnicas de cultura pura O equipamento necessário para a inoculação primária de amostras é relativamente simples:

Técnicas de cultura pura Ágar semi-sólido para provas de motilidade Repique por picada com movimento em S Aspecto da placa após a semeadura por estrias Espalhamento nos quatro quadrantes

Técnicas de cultura pura Pour Plate: Consiste na transferência de alíquota de 1 a 2 mL da diluição da amostra (de cada diluição a ser considerada) para réplicas de placas de Petri estéreis (usualmente de 2 a 3 a cada diluição); O meio de cultura estéril fundido e resfriado a 45 – 48°C, em quantidade de cerca de 20 mL, é vertido sobre cada uma das placas contendo amostra, realizamos então a homogeneização com movimentos em S ou 8 sobre a bancada de trabalho, as quais permanecem até solidificação a temperatura ambiente;

Técnicas de cultura pura Pour Plate: Após 2 a 5 dias de incubação a 30 – 35°C, para bactérias e 5 a 7 dias para bolores e leveduras, a 20 – 25°C, as colônias são contadas; Segue-se incubação das placas, em estufa, na posição invertida;

Técnicas de cultura pura Semeadura da amostra em superfície: O meio de cultura é preparado e distribuído previamente em placas de Petri. Empregando-se pipetas estéreis, volumes de 0,1 a 0,5 mL de cada diluição considerada são distribuídos na superfície do gel já solidificado, sendo o espalhamento efetuado com movimentos cuidadosos ou com o auxílio de bastão de vidro ou alça de Drigalski; A escolha do meio de cultura, condições de incubação e cálculos para determinação da carga contaminante viável equivalem ao descrito para a técnica Pour Plate; Na dependência da densidade da amostra, haverá absorção total pelo meio. As placas invertidas são então incubadas;

Técnicas de cultura pura Staphylococcus aureus Mycobacterium bovis Para a conservação dos microrganismos há a possibilidade de refrigeração ou liofilização;

Microscópios A ampliação útil é limitada pela resolução; O microscópio óptico pode ampliar um objeto por aproximadamente 2000 vezes, mas sua ampliação máxima útil é de 1000 vezes o tamanho original; Existem lentes no condensador, nas objetivas e na ocular; As objetivas podem ser de baixo poder, alto poder e de imersão; A ampliação útil é limitada pela resolução;

Microscópios Microscópio Eletrônico de varredura (MEV) Microscópio Eletrônico de transmissão (MET)

Microscopia Microscopia de campo claro: Microscopia de campo escuro: Utiliza uma fonte de luz direta semelhante a uma lâmpada de luz ou à luz do dia, que ilumina todo o campo contendo a amostra, como a maioria das técnicas de coloração mata os microrganismos esta é uma limitação; Microscopia de campo escuro: Utiliza um microscópio luminoso equipado com uma objetiva e um condensador especial para iluminar os microrganismos em uma amostra, contra um fundo escuro;

Microscopia Microscopia de fluorescência: É a técnica de microscopia óptica utilizada na prática clínica para a observação de espécimes corados com um corante fluorescente que absorve a energia da luz com comprimentos de onda curtos, como aqueles da luz azul; Microscopia de contraste de fase: Utiliza um microscópio luminoso modificado que permite maior contraste entre materiais de espessuras ou densidades diferentes. O resultado é uma imagem com graus variáveis de luminosidade (contraste);

Microscopia Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET): Geralmente são utilizadas quando utilizamos corantes ou cortamos os microrganismos em seções finas. Aqui os feixes de elétrons atravessam o espécime e transmissão destes feixes forma uma imagem; Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV): O feixe de elétrons se move para trás e para frente da superfície dos microrganismos. Fornece uma visão tridimensional da superfície celular e dá uma ideia sobre certos aspectos físicos, tais como aderência;

Microscopia de contraste de fase Microscopia de campo escuro Par obter uma imagem clara e detalhada em um microscópio óptico, as amostras devem ter um alto contraste com seu meio. Assim devemos diferenciar o índice de refração das amostras daquele do seu meio; Microscopia de contraste de fase Microscopia de campo escuro

Anatomia funcional das células procarióticas Teoria endossimbiôntica Mitocôndria Cloroplasto

Procarióticos e Eucarióticos

A célula procariótica

Estrutura da parede celular bacteriana

Estrutura da parede celular bacteriana

Estrutura da parede celular bacteriana

Técnica de coloração de Gram

OBRIGADO