Centrifugação e Eletroforese Monitoria – Biofísica 01

Eletroforese

Centrifugação

O que é centrifugação? É um processo de separação em que a força centrífuga relativa gerada pela rotação da amostra é usada para sedimentar sólidos em líquidos, ou líquidos imiscíveis de diferentes densidades, separando-os. É usada em diferentes aplicações laboratoriais, industriais e domésticas. Realizar a centrifugação é acelerar o processo de decantação. Se o objectivo for separar rapidamente o sólido de um líquido, podemos submeter a mistura a uma centrífuga. Ela vai girando em alta velocidade e depositando no fundo as partículas sólidas, que são mais densas.

Técnica de centrifugação Em geral, as misturas de interesse são introduzidas em tubos de diferentes tamanhos, que são dispostos num rotor de centrífuga. As centrífugas estão normalmente adaptadas para a utilização de diferentes tipos e tamanhos de rotores, conforme a velocidade e aplicação desejadas.

Técnica de centrifugação Quando uma suspensão de partículas é centrifugada a sedimentação das partículas é proporcional à força aplicada. As propriedades da solução também irão interferir na taxa de sedimentação. Qualquer corpo ou partícula que apresente um movimento circular uniforme está submetido a uma força centrípeta, que tem como referência, o centro da trajectória circular que a partícula descreve, e pode ser representada pela relação:

Técnica de centrifugação Quando uma suspensão de partículas é centrifugada a sedimentação das partículas é proporcional a força aplicada. As propriedades da solução também irão interferir na taxa de sedimentação. Qualquer corpo ou partícula que apresente um movimento circular uniforme está submetido a uma força centrípeta, que tem como referencia, o centro da trajetória circular que a partícula descreve, e pode ser representada pela relação: Fc = m . ac = m .v2/r , onde: m = massa do corpo ac = aceletração centripetal v = velocidade r = raio de rotação

Fatores que influenciam Viscosidade da massa Concentração da massa Tamanho e regularidade dos cristais Rapidez da aceleração Força centrífuga: velocidade / diâmetro Tempo de friagem e descarga

Princípios básicos de sedimentação Ao planejar um protocolo de centrifugação é importante ter em mente que: Quanto mais densa a estrutura biológica, mais rapidamente ela sedimenta num campo centrifugo. Quanto mais massiva a partícula biológica, mais rapidamente ela se move num campo centrifugo Quanto maior o coeficiente de fricção, mais lentamente a partícula vai se mover. Quanto maior a força centrifuga, mais rapidamente a partícula sedimenta. A velocidade de sedimentação de uma dada partícula será zero quando a densidade da partícula é igual a do meio ambiente.

Aula prática

Aula prática As técnicas que permitem o fracionamento celular e a obtenção de frações relativamente puras de organelas contribuíram muito para o desenvolvimento da biologia. As organelas são separadas pela centrifugação de um homogeneizado de células em que as membranas plasmáticas são rompidas.

Cuidados a ter com a centrífuga Verifique se o rotor correto está sendo usado e se ele está corretamenteinstalado no eixo. Verifique se o rotor está preso antes de iniciar. Equilibre a carga no rotor - cada tubo necessita de um tubo de equilíbrio no compartimento oposto, com o mesmo volume de fluido;   Verifique se você está usando o tubo de centrífuga apropriada para o trabalho - eles podem se romper a uma velocidade muito alta. Você vai precisar de tubos especiais para altas velocidades de centrifugação.