Tecnologia do DNA Recombinante (rDNA)
História Intervenientes Processamento Possíveis Aplicações
Nos finais da década de 60, o DNA ainda era uma molécula inacessível, sendo a manipulação do material genético uma actividade impossível. Com o desenvolvimento da tecnologia do DNA recombinante, os domínios da citologia e da história evolutiva ganharam outra importância.
Plasmídeo/ Vector – fragmento de DNA que é utilizado para transportar o segmento de DNA com interesse Enzimas/ Endonucleases de Restrição – Reconhece sequencias especificas alvo no DNA, e que quebra a dupla cadeia de DNA. DNA complementar (cDNA) – DNA sintético que é produzido a partir de um RNAm pela acção da Transcriptase reversa
Ligase do DNA – Enzima que volta a ligar covalentemente as duas cadeias de DNA, depois de estas se terem emparelhado por complementaridade de bases. DNA recombinante – Nova molécula formada artificialmente de duas ou mais moléculas de DNA de origens diferentes. Transcriptase reversa – Enzima que cataliza a síntese de uma cadeia simples de DNA, a partir de uma cadeia de RNAm que funciona como molde .
Selecciona-se uma molécula de DNA dadora, contendo o gene com interesse que se pretende transferir e clonar, e um vector adequado. A molécula de DNA e o vector são tratados com a mesma enzima de restrição, que corta as duas moléculas em regiões com a mesma sequência de nucleótidos. Misturam-se os fragmentos de restrição da molécula de DNA e o vector e juntam-se ligases do DNA. O vector e os fragmentos de restrição emparelham pelas extremidades coesivas, que são complementares, e a ligase estabelece a ligação.
O vector, contendo o DNA dador, é transferido para uma célula ou organismo receptor. O DNA dador é incorporado no genoma da célula ou organismo receptor, que passa a possuir um DNA recombinante. Um meio selectivo ou testes químicos permitem identificar as células que exprimem o gene desejado. No processo descrito formam-se fragmentos de restrição que não têm o gene desejado e nem todas as células receptoras incorporam o DNA dador. .
Produção de Insulina Hormona de Crescimento Produção de vacinas Factores de coagulação sanguínea para doentes com hemofilia