Universidade Federal de Pelotas Centro de Biotecnologia Técnicas Instrumentais MÉTODOS de ESTERILIZAÇÃO Flávia Aleixo Vasconcellos Doutoranda em Biotecnologia eualevas@yahoo.com.br

OS PRINCIPAIS MÉTODOS DE ESTERILIZAÇÃO APLICADOS EM LABORATÓRIO OBJETIVO DA AULA CONHECER E DESCREVER OS PRINCIPAIS MÉTODOS DE ESTERILIZAÇÃO APLICADOS EM LABORATÓRIO

ESTERILIZAÇÃO Processo que DESTRÓI ou ELIMINA agentes transmissíveis das superfícies e equipamentos. FUNGOS, BACTÉRIAS, VÍRUS e ESPOROS

DESINFECÇÃO X ANTISSEPSIA “Limpar” um OBJETO ou INSTRUMENTOS de organismos patogênicos DESINFETANTES São agentes antimicrobianos aplicados à OBJETOS e INSTRUMENTOS para destruir microorganismos. ANTISSEPSIA “Limpar” um TECIDO VIVO ANTISSÉPTICOS São substâncias antimicrobianas aplicadas a TECIDOS VIVOS para reduzir a possibilidade de infecção. OBS: Álcool 70% - maior difusão e menor evaporação ASSEPSIA

Métodos físicos CALOR SECO FORNO PASTEUR ou ESTUFA Provoca a OXIDAÇÃO dos constituintes celulares, DESNATURAÇÃO e a COAGULAÇÃO das proteínas Indicação - Metais, Vidros, Pós Contra-indicação - Tecidos, Borrachas e Líquidos Tempo e Temperatura: 2h à 170°C ou 12h à 120°C

Métodos físicos CALOR ÚMIDO AUTOCLAVE TERMOCOAGULAÇÃO das proteínas bacterianas. Elimina bactérias, vírus, fungos, esporos (exceção: prions) Indicação - Metais, Vidros, Tecidos, Borrachas Contra-indicação - (alguns) Tecidos, Borrachas e Líquidos Tempo e Temperatura 15-20 min à 121°C Avaliação da eficácia: Fita adesiva Tubos com suspensão de esporos de Bacillus stearothermophylus (12 min a 121°C)

PRÁTICA

Métodos físicos RADIAÇÃO por RAIOS GAMA COBALTO altera a COMPOSIÇÃO MOLECULAR das células, sofrem IONIZAÇÃO, ficando carregadas negativa ou positivamente, modificando o DNA (Processo a frio, por isso não danifica embalagens e invólucros) Indicação: Plásticos descartáveis por ULTRAVIOLETA 15min – Somente superfícies

Métodos físicos FILTRAÇÃO A técnica é considerada esterilizante conforme o diâmetro dos POROS. diâmetro igual ou inferior a 0.2 μm ( embora não retenham VÍRUS) Os FILTROS podem ser de vários tipos : ex: velas porosas, discos de amianto, filtros de vidro poroso, de celulose, e filtros “millipore” (membranas de acetato de celulose ou de policarbonato Indicação: Líquidos

Métodos químicos Gases e Líquidos Glutaraldeído Vantagem Facilidade de uso Desvantagens É tempo dependente Necessário a imersão total do material. Alergênico, tóxico e irritante. Mycobacterias podem ser resistentes, bem como esporos. Formaldeído 180 min a temp. 50-60°C Utilizado em processos fechados, (autoclave especial) A esterilização é eficiente, depende de umidade local controlada. Desvantagens Requer equipamento específico Controle rigoroso

DESINFECÇÃO: ....considerações sobre SOLUÇÕES GERMICIDAS DESINFECÇÃO DE BAIXO NÍVEL(tempo de exposição< ou= a 10 minutos) São destruídas as bactérias em forma vegetativa, alguns vírus e alguns fungos. O Mycobacterium tuberculosis, os esporos bacterianos ,o vírus da Hepatite B (HBV) e os vírus lentos sobrevivem. Ex:Álcool etílico e isopropílico, Hipoclorito de Sódio Fenólicos, Iodóforos*, Quaternário de amônia, DESINFECÇÃO DE MÉDIO NÍVEL (depende da concentração e/ou período de exposição) Além…são atingidos o Mycobacterium tuberculosis, a maioria dos vírus (inclusive o HBV) e a maioria dos fungos. Ainda sobrevivem os Mycobacterium intracelulares, os esporos bacterianos e os vírus lentos. Ex:Álcool etílico e isopropílico (70 a 90%), Fenólicos, Iodóforos, Hipoclorito de Sódio(100ppm) Pasteurização 75o C a 30 minutos. DESINFECÇÃO DE ALTO NÍVEL (Tempo de exposição >ou= 20 minutos ) Resistem apenas alguns tipos de esporos bacterianos mais resistentes e os vírus lentos Ex: Glutaraldeído, Solução de Peróxido de Hidrogênio, Hipoclorito de sódio (1000ppm), Cloro e compostos clorados

Mais resistentes Príons Esporos bacterianos Micobactéria Cistos de protozoários Protozoários vegetativos Bactéria Gram-negativa Fungo e maioria de esporos de fungos Vírus não envelopados Bactérias Gram-positivo Menos Resistentes Vírus sem envelope lipídico

Método IDEAL de Esterilização Rápido Eficaz contra todos microrganismos Não tóxico De fácil penetração Estável Aplicável a vários materiais e tecido humano Sem odor e cor Custo reduzido

“ENCARE A TÉCNICA ÉSTERIL ANTES e DEPOIS....... “ENCARE A TÉCNICA ÉSTERIL NÃO APENAS COMO UMA MANEIRA DE ABRIR E MANIPULAR AS CULTURAS EM AMBIENTE ESTÉRIL, MAS COMO UMA MANEIRA DE PENSAR E DE AGIR SEMPRE NO LABORATÓRIO.” OBRIGADA!