U N I V E R S I D A D E D E S Ã O P A U L O CENTRO DE ENERGIA NUCLEAR NA AGRICULTURA LABORATÓRIO DE INSTRUMENTAÇÃO NUCLEAR EMPREGO DA FLUORESCÊNCIA DE RAIOS X POR REFLEXÃO TOTAL PARA A DETERMINAÇÃO DA COMPOSIÇÃO QUÍMICA DE MATRIZES BIOLÓGICAS Eduardo de Almeida1 e Virgílio F. do Nascimento Filho1,2 1 - Lab. de Instrumentação Nuclear/CENA/USP 2 - Depto de Ciências Exatas/ESALQ/USP OBJETIVO Este trabalho teve como objetivo a utilização da técnica multielementar de fluorescência de raios X por reflexão total (TXRF) para a determinação da composição química de amostras biológicas. Foram analisadas as amostras de referência homogeneizado de peixe (fish homogenated IAEA-MA-A-2), Copepod (IAEA-MA-A-1), sangue animal (animal blood IAEA-13), feno em pó (hay powder IAEA-V-10), leite em pó (milk powder IAEA-153), farinha de centeio (rye flour IAEA-V-8), e também amostras biológicas liofilizadas (músculo, rim e fígado), previa-mente digeridas por vias seca e úmida. MATERIAIS Foram digeridas amostras biológicas liofilizadas e de referência por vias seca e úmida (três repetições). Digestão via seca: 500 mg da amostra biológica foram colocadas em cadinho de porcelana, seguindo encineração a 500 oC por 12 h, retomando as cinzas em 2 ml de HNO3 (20 % v/v). Digestão via úmida: 500 mg foram digeridos utilizando HNO3 concentrado e H2O2 em sistema aberto. Em ambas digestões, os volumes foram aferidos para 10 ml. Sensibilidades elementares: utilizou-se padrões multielementares (Aldrich/USA), na faixa de 0 - 5 g.ml-1. MÉTODOS Na análise dos padrões e amostras utilizou-se o elemento Ga como padrão interno, pipentando-se 10 l sobre suporte de quartzo. Excitação: tubo de raio X (alvo: Mo; filtro: Zr; 45 kV/25 mA). Detecção de raios X: semicondutor de Si(Li), acoplado a analisador de pulsos multicanal. Arranjo experimental vista geral detalhe - TXRF Espectros de raios X de amostras biológicas utilizando a TXRF ESMERALDA POLIDA AMETISTA LAPIDADA AMETISTA POLIDA AMETISTA LAPIDADA ESMERALDA LAPIDADA Figura 4. Espectro da amostra fígado liofilizado, digerido por via-úmida. Figura 3. Espectro da amostra de peixe homogeneizado, digerido por via-úmida. BET BES Figura 1. Curva de sensibilidade analítica dos elementos V, Mn e Ni. Tabela 1 - Valores de concentração (mg.g-1) e intervalo de confiança para os elementos Mn, Fe, Cu e Zn na amostra de feno em pó, digerido por vias seca e úmida e também os valores certificados (3 repetições, 95 % de probabilidade). SEI Tabela 2 - Limites] de detecção (mg.g-1) para os elementos Mn, Fe, Cu e Zn, nas diferentes amostras biológicas. CITRINO AMARELO LAPIDADO AMETISTA POLIDA Figura 2. Sensibilidade relativa em função do número atômico. CONCLUSÕES A técnica de fluorescência de raios X por reflexão total por ser uma técnica multielementar, necessitar de pequenas quantidades de amostras, e ser relativamente barata, mostrou-se muito promissora para a análise de amostras biológicas. Os valores obtidos das concentrações de Mn, Fe, Cu e Zn, em ambos métodos de digestão, foram concordantes com os valores certificados, e estes dois métodos de digestão não apresentaram diferenças significativas. Futuros estudos visando a utilização de suportes de amostras mais baratos, como lúcite, deverão ser realizados. Financiadora : FAPESP SEI