III Encontro Nacional de Tuberculose Identificação e tipagem molecular de cepas de MCR isoladas de infecções em procedimentos invasivos no Pará e em outros estados do Brasil Cristina Viana-Niero III Encontro Nacional de Tuberculose

Grupo M. chelonae-abscessus Micobactérias de crescimento rápido, Amplamente distribuídas na natureza, Patógenos oportunistas. M. abscessus (Kusunoki, S., and T. Ezaki. 1992; Lévy-Frébault et al., 1986) M. chelonae (Kusunoki, S., and T. Ezaki. 1992; Lévy-Frébault et al., 1986) M. immunogenum (Wilson et al.,2001; Sampaio et al., 2006) M. massiliense (Adékambi et al., 2006; Simmon et al., 2007) M. bolletii (Adékambi et al., 2006)

Cirurgias laparoscópicas 58 Surto envolvendo 311 pacientes submetidos a diferentes procedimentos invasivos em 16 hospitais e clínicas em Belém, PA (2004 e 2005) Procedimentos no. de isolados Cirurgias laparoscópicas 58 (2 mamoplastias e 1 liposucção) Injeção intra muscular Mesoterapia 1 8 No. de isolados

Amostras isoladas no Instituto Evandro Chagas, Belém, PA PRA-hsp65 m B H Características fenotípicas: tempo de crescimento (< 7 dias e ausência de pigmentação) Identificação molecular inicial: PRA-hsp65 (PCR-Restriction Enzyme Analysis) 250 200 75 50 BstEII [bp] (235, 210) HaeIII [bp] (200, 70, 60, 50) M. abscessus 2, M. massiliense e M. bolletii (Devallois et al., 1997; Adékambi et al., 2004 e 2006)

Análise por seqüenciamento do gene hsp65 Isolados Diferenças de nucleotídeos na seqüência do gene hsp65 posição 187 229 340 M. massiliense CIP 108297 C G T M. abscessus 2 ATCC 14472 T C C M. bolletii CIP 108541

Índice de similaridade (%) Seqüenciamento do gene hsp65 11 isolados obtidos após cirurgias laparoscópicas e 1 após injeção Número de acesso GenBank Cepas No. de nucleotídeos idênticos/total Índice de similaridade (%) AY596465 M. massiliense CIP108297 401/401 100 AY859675 M. bolletii CIP108541 398/401 99,25 DQ869273 M. abscessus 2 ATCC14472 AY458075 M. abscessus 1 CIP104536 396/401 98,75 AY458082 M. chelonae ATCC19237 372/401 92,5 DQ288262 M. immunogenum 2 F1112 370/401 92,26 AY458081 M. immunogenum 1 CIP106684 367/401 91,52 < 97% de similaridade espécies diferentes McNabb et al., 2004

< 1,7% de divergência mesma espécie > 3% de divergência espécies diferentes

Índice de similaridade (%) Seqüenciamento do gene rpoB 11 isolados obtidos após cirurgias laparoscópicas Número de acesso GenBank Cepas No. de nucleotídeos idênticos/total Índice de similaridade (%) AY593981 M. massiliense CIP 108297 706/711 99,29 AY859692 M. bolletii CIP 108541 700/711 98,45 DQ288264 M. immunogenum 2 F1112 633/651 97,23 AY262739 M. immunogenum 1 CIP106684 691/711 97,18 AY147164 M. abscessus 1 CIP 104536 686/711 96,48 AY262740 M. chelonae ATCC 19237 679/711 95,49 ND M. abscessus 2 ND não disponível Injetável: 4 nucleotídeos de diferença em relação as amostras de cirurgia (99,37%) < 1,7% de divergência mesma espécie > 3% de divergência espécies diferentes Adékambi et al., 2003

Índice de similaridade (%) Seqüenciamento do gene rpoB 8 isolados obtidos após mesoterapia Número de acesso GenBank Cepas No. de nucleotídeos idênticos/total Índice de similaridade (%) AY859692 M. bolletii CIP108541 711/711 100 (2 cepas) 710/711 99,85 (3 cepas) 709/711 99,56 (3 cepas) Espécie diferente procedimento diferente surto distinto

EPIDEMIOLOGIA MOLECULAR Isolados clínicos previamente identificados isolados de uma mesma espécie são “iguais” ou “diferentes”? Tipagem molecular por PFGE (Pulsed Field Gel Electrophoresis)

PFGE Pulsed Field Gel Electrophoresis Suspensão bacteriana Mix: bactéria e agarose = plug Lise bacteriana (liberação de DNA) Digestão enzimática Eletroforese em campos alternados Captura de imagem e análise de dados Critério de interpretação (Tenover et al., 1997)

Critérios de interpretação Resultado de PFGE No. de bandas diferentes Correlação epidemiológica relacionada Isolado é parte do surto Fortemente relacionada 2-3 Isolado é provavelmente parte do surto Possivelmente relacionada 4-6 Isolado é possivelmente parte do surto Não relacionada > 7 Isolado não pertence ao surto

mesoterapia

59 isolados - PA 18 isolados - GO 22 isolados - ES 30 isolados - RJ 5 isolados - PR 9 isolados - RS

PFGE Pulsed Field Gel Electrophoresis

Conclusões Os casos de infecção após mesoterapia, ocorridos em Belém, foram causados por M. bolletii e divididos em três grupos por rpoB e PFGE. O isolado obtido após uso de injetável foi identificado como M. massiliense mas apresentou seqüência do gene rpoB e perfil de PFGE diferente dos isolados provenientes de cirurgias. Os casos de infecção após cirurgias em diferentes estados brasileiros foram causados por uma única cepa de M. massiliense, sugerindo uma única fonte de infecção. A identificação de espécies estreitamente relacionadas exige a realização de vários testes fenotípicos e moleculares.

Michelle Christiane da Silva Rabello Sylvia Cardoso Leão Cristina Viana-Niero Michelle Christiane da Silva Rabello Sylvia Cardoso Leão Departamento de Microbiologia, Imunologia e Parasitologia, UNIFESP Universidade Federal de São Paulo, SP Rafael da Silva Duarte Universidade Federal do Rio de Janeiro, RJ Moisés Palaci Universidade Federal do Espírito Santo, ES Maria Cristina Lourenço Fundação Osvaldo Cruz, Rio de Janeiro, RJ André Kipnis Universidade Federal de Goiás, GO Marta Osório Ribeiro IPB Lacen Rio Grande do Sul, RS