Métodos de extracção e identificação de lípidos Ana Rita Amorim Mariana Anjos Catarina Antunes Joana Araújo Cátia Araújo Mariana Asseiro Paulo Augusto.

Apresentação em tema: "Métodos de extracção e identificação de lípidos Ana Rita Amorim Mariana Anjos Catarina Antunes Joana Araújo Cátia Araújo Mariana Asseiro Paulo Augusto."— Transcrição da apresentação:

1 Métodos de extracção e identificação de lípidos Ana Rita Amorim Mariana Anjos Catarina Antunes Joana Araújo Cátia Araújo Mariana Asseiro Paulo Augusto Rita Azevedo Bruno Moutinho Catarina Silva Ana Sofia Bastos Ana Beatriz Barata Helena Barbosa Bioquímica I - Seminário Orientado 4

2 1. Analisar diferentes métodos para extracção de lípidos em amostras biológicas. 2. Discutir diferentes métodos de análise de lípidos, incluindo a sua identificação. 3. Explicar exemplos do estudo de lípidos para o diagnóstico em Medicina.

3 Grupo quimicamente, Heterogéneo Ácidos gordos e os seus derivados Esteróis Vitaminas A,D,E,K Hormonas Sais biliares Definição: Moléculas orgânicas insolúveis na água e solúveis em solventes apolares. A maioria são Ésteres/Amidas de Ácidos gordos Reserva nutritiva 9 kcal/g Pré-requisitos: aulas no 2 e 5 de Bioquímica I Constituintes funcionais e estruturais das membranas

4 Métodos a Quente SoxhletGoldfish Métodos a Frio Folch Bligh- Dyer Outros métodos com solventes FerrazHajra Baldoni et al Hara & Radin Burton

5 Soxhlet Processo semi-contínuo Duração: 7 a 12h Utiliza mais solvente Goldfish Processo contínuo Duração: 4 a 7h Utiliza menos solvente Extractor de Soxhlet

6 1. Homogeneizar o tecido com uma mistura de clorofórmio e metanol, na proporção 2:1 2. Adição de solução de um sal ou água (no caso da água, pelo menos 5 vezes o volume da solução homogeneizada) 3. Separação das fases (lípidos dissolvidos – clorofórmio) (proteínas e açúcares – metanol e água)

7 Versão simplificada do método Folch 1. Homogeneizar o tecido com uma mistura de clorofórmio, metanol e água 2. Adição de água e clorofórmio 3. Separação das fases (lípidos dissolvidos – clorofórmio) (proteínas e açúcares – metanol e água) Separados por evaporação do clorofórmio e pesagem dos lípidos

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9 Lípidos Propriedades Químicas Índice de Iodo Reacção Libermann - Buchard Propriedades Físicas Ponto de Fusão SolubilidadeViscosidadeDensidade Índice de Refracção

10 Ponto de Fusão Ponto de Fusão – depende do ácido gordo: tamanho da cadeia, grau de saturação e configuração estrutural; Viscosidade Viscosidade – relaciona-se com o tamanho das cadeias do ácido gordo e é inversamente proporcional às insaturações; Índice de Refracção Índice de Refracção - aumenta com a insaturação dos ácidos gordos e com o aumento da cadeia.

11 Método do Índice de Iodo (I.I.) ou índice de Hübl Método de Libermann- Buchard

12 Este método permite determinar o grau de insaturação de um lípido. Baseia-se no facto do iodo e outros halogéneos se fixarem às ligações duplas dos ácidos gordos da amostra. A coloração azul da solução de iodo diminui de intensidade. Método do Índice de Iodo (I.I.) ou índice de Hübl

13 O colesterol e os seus ésteres apresentam colorações características quando reagem com alguns grupos químicos. Na presença de anidrido acético e ácido sulfúrico concentrado, o complexo resultante apresenta uma coloração azul-esverdeada. Este método permite identificar o colesterol total da amostra. VioletaAzulVerde Método de Libermann- Buchard

14 Espectometria de massa Espectometria de massa Permite determinar a massa molecular, quantificar biomoléculas (lípidos) e fragmentá-las de forma a descobrir a sua estrutura Através de um bombardeamento de um feixe electrões.

15 Cromatografia em camada fina – Técnica de Afinidade Fase estacionária: matriz Fase móvel: solvente apolar Ex: separação de Triglicerídeos polar Ex: separação de fosfolípidos

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17 O que são? alteração dos níveis sanguíneos de lípidos circulantes (colesterol, triglicerídeos ou HDL) Diagnóstico: medição dos níveis de colesterol total, triglicerídeos e lipoproteínas

18 Colesterol Molécula esteróide de baixa solubilidade em água, que circula no sangue associado a lipoproteínas (LDL e HDL) Colesterol LDL Colesterol HDL - “mau colesterol” - colesterol do fígado para a corrente sanguínea - “ bom colesterol”. - colesterol da corrente sanguínea para o fígado. Elevados valores de colesterol LDL Baixos valores de colesterol HDL ELEVADO RISCO DE ATEROSCLEROSE Macrófagos existentes nas paredes das artérias acumulam colesterol transportado pela LDL Acumulação de gordura na parede das artérias Formação de ateromas -Dieta com elevado conteudo em gorduras saturadas -Abuso de alcool -Cirrose -Insuficiencia renal

19 Diagnóstico razão entre fosfatidilcolina/esfingomielina no liquido amniótico. Necessidade de tratamento Os bebés prematuros desenvolvem SDR devido à imaturidade dos seus pulmões, causada por uma deficiência de surfactante pulmonar.

20 O que acontece? ocorre acumulação de esfingolípidos no fígado, baço e rins porque existe uma deficiência enzimática que não permite a degradação dos mesmos. O que são? são doenças genéticas na maioria autossómicas recessivas Exemplo: Doença de Gaucher Diagnóstico Análise do nível de actividade da enzima glicocerebrosidase; Biópsia do órgão envolvido para identificar directamente as células de Gaucher.

21 http://www.moreirajr.com.br/revistas.asp?fase=r003&id_materia=217 http://www.biopsicologia.net/nivel-3-participacion-plastica-y-funcional/5.3.1.-fosfolipidos.html http://elmercaderdelasalud.blogspot.com/2011/01/el-sistema-surfactante-pulmonar.html http://www.merckmanuals.com/professional/endocrine_and_metabolic_disorders/lipid_disorders/dyslipidemia.html?qt=&s c=&alt= http://estudmed.com.sapo.pt/cardiologia/dislipidemia_tratamento_diagnostico_1.htm http://gaucherparapacientes.com.br/pt- BR/patient/about/SignsAndSymptoms.aspx?gclid=CMmlmrTP_6sCFcgc4QodAGMzkg www.actamedicaportuguesa.com/pdf/2007-20/2/175-178.pdf http://mms.technologynetworks.net/posters/0270.pdf http://www.mendeley.com/research/comparison-six-methods-extraction-lipids-serum-terms-effectiveness-protein- preservation/# http://www.nshtvn.org/ebook/molbio/Current%20Protocols/CPFAC/fad0101.pdf Lehninger Principles of Biochemistry (D.L. Nelson & M. M. Cox) 4ª Ed., W. H. Freeman & Company, 2004. Biochemistry (J. M. Berg, J. L. Tymozko, L. Stryer) 6ª Ed., W. H. Freeman & Company, 2006. Hara, A., & Radin, N. (1978). Lipid Extraction of tissues with a low-toxicity solvent. Analytical Biochemistry, 420-426. Ivane Benedetti Tonial MM, Nilson Evelázio de Souza, João Ângelo de Lima Perini,, Damila Rodrigues de Morais FAB, Jesuí Vergílio Visentainer. Avaliação de diferentes métodos de extração lipídica sobre a composição de ácidos graxos poliinsaturados em leite de vaca. Archivos latinoamericanos de nutricion. 2009;59:79-81. Rouser G, Bauman AJ, Kritchevsky G. New methods for the separation and quantitative isolation of lipids. Initial applications to the study of beef brain and spleen lipids in Gaucher's disease. Am J Clin Nutr. 1961 Jan-Feb;9:112-23. Folch J, Lees M, Sloane Stanley GH. A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues. J Biol Chem. 1957 May;226(1):497-509. Aelson Aloir Santana Brum LFdAeMABR-dA. Métodos de extração e qualidade da fração lipídica de matérias-primas de origemvegetal e animal. Quim Nova. 2009;32:849-54.

22 FIM DA APRESENTAÇÃO

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