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UBA III – Biologia Molecular Aula Laboratorial 1 2013/2014 Maria José Correia

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Apresentação em tema: "UBA III – Biologia Molecular Aula Laboratorial 1 2013/2014 Maria José Correia"— Transcrição da apresentação:

1 UBA III – Biologia Molecular Aula Laboratorial /2014 Maria José Correia

2 UBA-III Biologia Molecular 2013/2014 Sumário L1 Apresentação sucinta do programa das aulas laboratoriais; Segurança no laboratório Introdução às técnicas básicas para o estudo dos ácidos nucleicos Isolamento e purificação de DNA

3 UBA-III Biologia Molecular 2013/2014 Programa AulaDataTema 110/10Introdução às técnicas básicas para o estudo dos ácidos nucleicos. 217/10Separação dos fragmentos de DNA em gel de agarose e análise dos resultados. Ficha de avaliação

4 UBA-III Biologia Molecular 2013/2014 Regras gerais : Nunca COMER, BEBER, FUMAR, aplicar lentes de contato ou cosméticos! Nunca cheirar soluções ou reagentes Nunca pipetar com a boca Lavar as mãos antes de iniciar o trabalho Segurança no laboratório

5 UBA-III Biologia Molecular 2013/2014 Atitudes : Usar o senso comum (a maioria dos acidentes de laboratório começa com algo simples); Estar consciente – conhecer os reagentes antes de os usar (ler os rótulos, etc.) Estar protegido – conhecer as práticas e equipamentos que podem aumentar a proteção (máscaras, luvas, etc.) Segurança no laboratório

6 UBA-III Biologia Molecular 2013/2014 Bancada : As bancadas de trabalho devem ser mantidas organizadas e limpas Identificar todo o material utilizando para isso marcadores de vidro apropriados Os lixos devem ser perfeitamente identificados O material de vidro estalado ou partido deve ser imediatamente rejeitado Segurança no laboratório

7 UBA-III Biologia Molecular 2013/2014 Protecção pessoal : Usar bata e manter os cabelos compridos apanhados; Usar a hotte sempre que necessário; Antes de abandonar o laboratório, limpar a bancada, retirar a bata e lavar as mãos. Segurança no laboratório

8 UBA-III Biologia Molecular 2013/2014 Ler os protocolos antes de cada aula prática Seguir atentamente as instruções fornecidas pelo docente antes de executar o trabalho proposto Depois de terminar o trabalho de cada aula arrumar a bancada. Instruções gerais

9 UBA-III Biologia Molecular 2013/2014 Manipulação de moléculas de DNA Isolamento e purificação de DNA genómico Separação em gel de agarose Aplicações biotecnológicas Introdução às técnicas para estudar os ácidos nucleicos

10 UBA-III Biologia Molecular 2013/2014 DNA lise celular libertação de todo o material intracelular precipitação de proteínas e detritos celulares purificação do DNA Técnicas de extração de DNA genómico

11 UBA-III Biologia Molecular 2013/2014 Lise mecânica/física Homogenizador Ultra-sonicador French pressure cell press Fervura e pressão osmótica Lise alcalina soluções fortemente alcalinas (de hidróxido de sódio) SDS (dodecil sulfato de sódio) Lise enzimática Proteases Rnases Lise celular

12 UBA-III Biologia Molecular 2013/2014 Fenol/Clorofórmio/Álcool isoamílico Fenol e clorofórmio desnaturam as proteínas Fase fenólica (proteínas em solução) separa-se da fase aquosa (DNA) Precipitação com etanol absoluto (ou isopropanol) Insolubilidade do DNA em etanol Presença de catiões monovalentes Precipitação diferencial

13 UBA-III Biologia Molecular 2013/2014 amostras diversas lise celular Precipitação de proteínas Precipitação de DNA Ressuspensão do DNA em TE (pH8.0) ou em água estéril Extração de ácidos nucleicos


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