Avaliação das aulas TP Microbiologia 2012-2013. Questões -TC 1.Quais as moléculas salivares identificadas como responsáveis pela adesão de streptococci.

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1 Avaliação das aulas TP Microbiologia 2012-2013

2 Questões -TC 1.Quais as moléculas salivares identificadas como responsáveis pela adesão de streptococci à saliva? Prps, aglutininas e alfa amilase. No caso da alfa amilase parece estar ligada à actividade catalitica da enzima

3 Questões -TC 2 – Quais as espécies de streptococci que têm estruturas de adesão? Que estruturas são essas? S. pyogenes, S.agalactiae e S.pneumoniae. Sobretudo pili filamentosos com subunidades ligadas convalentemente à superfície da célula.

4 Questões -TC 3 – Qual a importância dos pili na formação do biofilme nesta espécie? Que dados o demonstram? É essencial na figura 1 os poços sem com o mutante sem saliva não tinham filme. Os poços com mutante e saliva tinham um filme defeituoso tal como os poços com saliva e bactéria normal Só nos poços com wt e saliva houve biofilme eficaz.

5 Questões -TC 4 – Das proteínas estudadas quais tinham maior capacidade de se ligar às proteinas salivares? liga-se a todas mas mais a pilC e pilB. A pilA não liga muito eficientemente. Figura 3b

6 Questões -TC 5 – Quais os controlos usados na experiência anterior? Foram usadas a FNBP e a BSA. Estas proteínas não ligaram à saliva.

7 Questões -TC 6 – Que técnica foi usada para estudar a estrutura dos pili? criaram-se anticorpos contra as recombinantes pilA, pilB e pilC. Estes anticorpos foram testados contra os pili das bactérias nativas e mutantes. Nas culturas bacterianas os pili foram libertados para a solução pondo as bacterias em contacto com mutalisina

8 Questões -TC 7 – Quais os resultados? Estão na figura 4 B. e mostram que pilA é o maior constituinte dos pili de S.sanguinis. Na figura 4 C vê-se a localização do pilA

9 Questões -TC 8 – Qual é especificamente a molécula salivar à qual se liga pilC? Liga-se especificamente à alfa amilase um proteína de 50 kD na saliva. Figura 5

10 Questões TA 1.A ligação Às moléculas dos pili pilB e pilC é a única que existe? Como se sabe? Figura 6. A.

11 Questões TA 2 – Na literatura aparece descrita a ligação da alfa amilase a proteínas bacterianas dependentes da sua atividade catalítica. Este estudo confirma isso? Como sabe? Não confirma pois mesmo com a alfa amilase desnaturada se dá a ligação. Fig 7

12 Questões TA 3 – Qual é especificamente a zona de pil C à qual se liga a alfa amilase? Como se sabe? Analisou-se a ligação a 3 fragmentos de pilC e verificou-se que havia mais ligação à zona do terminal C. Figura 7

13 Questões TA 4– A zona de pilC com mais afinidade para a amilase alfa partilha sequencia com outra proteína. Qual? Que importância tem isto? Foi testado? Collagen binding protein B domain. Há domínios de ligação conservados.

14 Questões TA 5–Qual a importância, no geral da adesão a moléculas da saliva? Permite a colonização inicial e persistência no biofilme oral.

15 Questões TA 6 –Que proteínas ligadoras da saliva são encontradas noutros streptococci? SsP5 da SspA/B de S.gordonii Pac/AgI/II/Spac de Strep mutans Fim A de S.parasanguinis AbpA e AbpB de Strep. gordoni

16 Questões TA 7 – O que se sabe sobre a sequência de aminoácidos destas outras proteínas ligadoras de amilase? Isso é importante? Porquê? Nalguns casos não se sabe a sequência. Se se soubesse poderia procurar-se no genoma de novas espécies sequenciadas por exemplo em projectos como o do HMP.

17 Questões TA 8 – Quais as conclusões principais do estudo? Que há estruturas de adesão à saliva em Strep sanguinis. Que essas estruturas estão nos pili Que são 3 proteínas diferentes A,B,eC Que não são as únicas responsáveis pelo biofilme Que têm preponderâncias e funções diferentes no processo de adesão.

18 Questões TB 1 –Quais as moléculas salivares identificadas como responsáveis pela adesão de streptococci à saliva? A que estruturas se ligam? Prps, aglutininas e alfa amilase. S. pyogenes, S.agalactiae e S.pneumoniae. Sobretudo pili filamentosos com subunidades ligadas convalentemente à superfície da célula.

19 Questões TB 2 – Faça a análise das figuras 1 e 2. O que demostram?

20 Questões TB 3 – Explique a figura 3 B.

21 Questões TB 4 – O que mostra a figura 4?

22 Questões TB 5 – Que resultados são apresentados na figura 5?

23 Questões TB 6 – Que conclusões se tiram da figura 6?

24 Questões TB 7 – O que mostra a figura 7?

25 Questões TB 8 –Que proteínas ligadoras da saliva são encontradas noutros streptococci? SsP5 da SspA/B de S.gordonii Pac/AgI/II/Spac de Strep mutans Fim A de S.parasanguinis AbpA e AbpB de Strep. gordoni

26 Questões TB 9 – O que se sabe sobre a sequência de aminoácidos destas outras proteínas ligadoras de amilase? Isso é importante? Porquê? Nalguns casos não se sabe a sequência. Se se soubesse poderia procurar-se no genoma de novas espécies sequenciadas por exemplo em projectos como o do HMP.

27 Questões TB 10 – Quais as conclusões principais do estudo? Que há estruturas de adesão à saliva em Strep sanguinis. Que essas estruturas estão nos pili Que são 3 proteínas diferentes A,B,eC Que não são as únicas responsáveis pelo biofilme Que têm preponderâncias e funções diferentes no processo de adesão.