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Interação entre Theobroma cacao e Crinipellis perniciosa Dr. Abelmon Gesteira DCB/UESC.

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Apresentação em tema: "Interação entre Theobroma cacao e Crinipellis perniciosa Dr. Abelmon Gesteira DCB/UESC."— Transcrição da apresentação:

1 Interação entre Theobroma cacao e Crinipellis perniciosa Dr. Abelmon Gesteira DCB/UESC

2 Interaction cacao-Crinipellis Crinipellis (Cp) Basidiomiceto Fase patogênica e saprofitica Sintomas Desenvolvimento anormal dos caules e flores Formação de vassouras Infecção dos frutos Conseqüências Econômicas Sociais Ambientais

3 Interação cacau-Cp: os sintomas

4 Bibliotecas de cDNA das interações compatível e incompatível Objetivo: Monitorar comparativamente a expressão diferencial de genes resultantes interação cacau-Cp Acessos utilizados - TSH1188 (resistente) RT - Catongo (susceptível) SP

5 Plantas cultivadas em casa de vegetação (Ceplac) Inoculação e cultura controladas (mistura de esporos, spray, umidade,…) 75.000 basidiósporos/mL

6 Sintomas e pontos de coleta Catongo Plantio 24h, 48h, 72h 5 DAI Inoculação (30d) 0

7 Extração de RNA: um novo método

8 Extração de RNA de cacau rRNA 5S rRNA 18S rRNA 28S RNA extraído dos diferentes pontos de coletas de TSH e Catongo Pool de RNA 24h, 48h, 72hCada 5 DAI 70 dias PlantioInoculação (30d) 0

9 Confecção das bibliotecas Smart Creator Kit (Clontech)

10 Características das bibliotecas The cocoa-Cp interaction libraries show a high library specificity (79.7 and 71.2%).

11 Distribuição dos ESTs por contig RT and SP libraries are represented by and, respectively.

12 ESTs as mais abundantes Library TC N° de ESTs in TC (%) Putative function of the gene family Species Expected Size (bp) 74 41 Unknown function homologue to Orf107a Arabidopsis thaliana 2.10 -27 521 9 37 Metallothionein-like protein Betula platyphylla 6.10 -26 651 19 32 Seed protein homolog to trypsin inhibitor Theobroma cacao 2.10 -93 929 112 28 Pathogenesis-related protein 4b Oryza sativa 1.10 -34 1058 184 13 Proline-rich protein Gossypium hirsutum 5.10 -10 184 76 12 Ribosomal RNA 18S Poncirus trifoliata 0.0 893 60 10 Unknown function Oryza sativa 6.10 -22 386 10 9 Metallothionein-like protein Petuniaxhybrida 2.10 -16 489 20 9 No hit - - 829 RT 42 9 Dehydrin Vaccinium corymbosum 2.10 -6 618 13 144 Metallothionein-like protein Betula platyphylla 6.10 -26 669 42 49 Unknown function homologue to Orf107a Arabidopsis thaliana 1.10 -27 266 20 29 Metallothionein-like protein Petuniaxhybrida 3.10 -16 535 141 26 Ankyrinrepeat family protein Arabidopsis thaliana 1.10 -9 625 103 13 Metallothionein-like protein Gossypium hirsutum 1.10 -24 495 57 10 Ankyrin repeat family protein Arabidopsis thaliana 7.10 -7 505 1 8 Unknown function Oryza sativa 7.10 -4 494 132 8 Putative copper chaperone Arabidopsis thaliana 2.10 -28 631 38 6 Nuclear factor 1 Mus musculus 1.10 -10 447 52 6 Unknown function Homo sapiens 1.10 -8 497 SP 124 6 Unknown function Mus musculus 1.10 -4 499

13 Comparação com outras bibliotecas de cacau Venn diagram showing the distribution of the sequences present in cacao libraries. a. From Verica et al., 2004. b. From Jones et al., 2002.

14 Outros genes de interesse Resistência/defesa: quitinases, HPRP, proteina rica em leucina, PRs, Bax inhibidor, U-box, cistatina, glucanase PCD/necrose: superoxide dismutase, oxalato oxidase, proteínas relacionadas a senescência, proteases, proteasoma 26S Parede celular: expansin, celulose sintase, peroxidases Detoxificação: transportador ABC, proteína de reparo Hormônios: proteína regulada por auxina, proteína reprimida por auxina, Fatores de transcrição: myb fator, WRKY, bzip Transdução: receptor kinase, calmodulina, MAP kinase Outros: Formato deshidrogenase, acido cafeico, glicerol aciltransferase, diacilglicerol kinase, transportador de sacarose

15 RT SP Poucas diferenças quantitativas com relação a classificação dos genes

16 Estudos funcionais de genes de interessem Glicanase Proteases Factor de transcription WRKY Bax Inhibidor (regulador de morte celular) PR 10

17 Estudo funcional da PR10 Clonagem em vetor de expressão (pET28a) Expressão em bacteria pLysBl21 Purificação da proteina em coluna His-Tag

18 Estudo funcional da PR10 Teste de atividade anti-fungica (Cp) Em pseudo-colonias (Freitas et al. 2005) Com 10 ug de PR10 Controle PR10 10 ug

19 Screening da biblioteca BAC Colaboração com o Cirad Estudos de promotores; Sondas: 27 cDNA interação cacao-Cp; Identificação de 21 clones BACs; sub-clonagem e sequenciamento de promotores.

20 Estudos de expressão / Arrays Colaboração com o Cirad PCR de todos ESTs de cada biblioteca de cDNA Confeção dos macroarrays (Nylon) Hibridização com sondas Catongo e TSH Projeto en andameto

21 Tese Defendidas Dahyana Santos Britto. Estudos funcionais de genes que codificam proteínas PR ( Pathogenesis Related Proteins) expressas em theobroma cacoa em resposta ao ataque de crinipellis perniciosa. 2005. Dissertação (Mestrado em Genética e Biologia Molecular) - Universidade Estadual de Santa Cruz,. Orientador: Abelmon da Silva Gesteira. Stênio Carvalho Santos. Caracterização de hidrofobinas do fungo Crinipellis perniciosa (Stahel) Singer, Causador da Doença vassoura-de-bruxa do cacaueiro. 2005. 53 f. Dissertação (Mestrado em Genética e Biologia Molecular) - Universidade Estadual de Santa Cruz. Orientador: Julio Cezar de Mattos Cascardo Joci Neuby Alves Macêdo. Caracterização funcional do indutor de necrose de Crinipellis perniciosa EM Theobroma Cacao L.. 2004. 54 f. Dissertação (Mestrado em Mestrado Em Genética e Biologia Molecular) - Universidade Estadual de Santa Cruz Orientador: Julio Cezar de Mattos Cascardo

22 Tese em Andamento Braz Tavares da Hora Junior. Determinação de genes envolvidos na resistência do cacau ao Crinipellis perniciosa via arrays. Início: 2006. Dissertação (Mestrado em Genética e Biologia Molecular) - UESC, Orientador - Fabienne Micheli Heliana Argolo Santos Carvalho. Estudo funcional de genes envolvidos na interação cacau-Crinipellis. Início: 2005. Dissertação (Mestrado em Genética e Biologia Molecular) - Universidade Estadual de Santa Cruz. Orientador – Fabienne Micheli Livia Santos Lima. Mapeamento de genes de resistência obtidos pela genômica da interação cacau-crinipellis, aplicados à programas de melhoramento. Início: 2005. Dissertação (Mestrado em Genética e Biologia Molecular) - UESC. Orientador Fabienne Micheli Maiza Alves Lopes. Estudo funcional de fatores de transcrição WRKY da interação cacau-Crinipellis perniciosa. Início: 2006. Tese (Doutorado em Genetica e Biologia Molecular) - Universidade Estadual de Santa Cruz. Orientador Fabienne Micheli Sarah Alves de Melo. Análise bioquímica e funcional do gene relacionada à patogênese (PR10) isolado de uma biblioteca de cDNA da interação entre Theobroma cacao e Crinipellis perniciosa. Início: 2006. Dissertação (Mestrado em Genética e Biologia Molecular) - Universidade Estadual de Santa Cruz Orientador - Abelmon Gesteira

23 Agradecimentos Fapesb UESC CIRAD Dr. Júlio Cascardo Dr. Nicolas Carles e Dra. Fabienne Micheli pela a análise de bioinformática Dra. Karina Gramacho Aos Bolsistas Aline Clara, Lorena Blosi e Antônio Carlos Rodrigues


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